ELISA试剂盒：数据分析

  ELISA是一种酶联免疫分析测定技术，提供一种检测或量化特定分析物浓度的工具。在实验中，ELISA的测定标准格式分为96微孔板（通常为8行12列）。每个微孔都经过预处理以产生反应，在大多数情况下，反应会导致微孔中溶液的颜色发生变化。分光光度计用于检测穿过该溶液的光量。孔从透明（无反应）变为深蓝色（100%反应），颜色变深时，可通过分光光度计记录的光密度读数变化检测出来。将未知分析物的浓度与标准曲线进行比较，该标准曲线是使用已知浓度的标准制剂构建的。

  ELISA数据输出类型

  ELISA数据输出类型分为3类，这3类分别如下：

  1.定性ELISA：该检测提供简单的阳性或阴性结果，它只能通过与没有抗原或无关对照抗原的空白孔进行比较来确认是否存在任何抗原。

  2.半定量ELISA：该检测方法比较被测样本中抗原的相对含量。检测到的信号强度将直接对应于抗原的含量。但是，由于ELISA试剂盒中不存在标准蛋白质，因此无法通过此方法计算出准确的浓度。

  3.定量ELISA：该检测方法可计算样本中抗原的准确含量。使用已知浓度的标准蛋白通过一系列连续稀释构建标准曲线。可以从标准曲线中插入未知的抗原浓度，以计算样本中抗原的含量。此程序最常用于报告ELISA数据。

  ELISA检测标准曲线

  使用标准或校准曲线定量计算待测样本中未知抗原的浓度。标准曲线是使用标准参考抗原的已知浓度与每个浓度的光密度（通常使用平板读数器在450nm处）绘制的。

  大多数酶标仪通常都配有软件，可自动进行数据分析和曲线拟合。通过外推标准曲线的线性部分来计算未知抗原。纪宁在这里建议在进行ELISA测定时，对样品进行两次或三次重复，以确保结果的良好统计验证。可以计算标准偏差(SD)和变异系数(CV)来评估移液的精度，最佳实践的CV值应保持在20%以下。

  此外，建议在ELISA板设置过程中加入阳性对照（已知分析物数量或存在分析物的样品）和阴性对照（没有分析物数量或存在的样品）。

  曲线拟合软件

  1.半对数图：使用浓度对微孔板读数的对数。生成典型的S形曲线，使数据点分布更均匀。该方法有助于抵消线性图导致的下端压缩。

  2.线性图：绘制一条曲线，一条轴表示抗原浓度，另一条轴表示微孔板读数。大多数情况下，R2值大于0.99表示曲线拟合良好。值得注意是，线性图会压缩数据点，尤其是在曲线的下端，这会导致分辨率降低。

  3.对数/对数图：这在低至中等浓度范围内很常见，因为它在此范围内具有良好的线性。但是，如果浓度增加到更高的范围，则会发现线性会消失。

  4.4PL或5PL曲线（4或5参数物流）：这些是高度复杂的程序，需要更复杂的计算。4PL方法基于感染点周围的对称性，而5PL方法考虑不对称性，对于大多数免疫测定来说，5PL通常更适合。

  峰值恢复

  加标回收有助于确定样品中是否存在可能干扰抗体与抗原结合过程的成分。该过程通过使用已知浓度的重组蛋白加标样品基质来执行。进行标准ELISA测定，并从标准曲线推断蛋白质浓度。蛋白质的回收率以百分比表示，通常，低于80%的值表示基质中存在干扰测定的成分。在这种情况下，我们建议使用不同的ELISA试剂盒。

  变异系数（CV）

  变异系数对于确定所获得的数据或结果中的任何不准确性或不一致性非常重要。这通常表示为相对于平均值的方差百分比。方差越大，预期的不一致或不准确性就越大。导致变异系数(CV)过高的一些常见因素包括样品污染、温度变化、移液错误、清洗不充分和孔变干。

  上述是纪宁为大家简要介绍下ELISA试剂盒数据分析的概念。数据分析是非常重要的工作，它可以检验ELISA实验的成果，了解这些概念可以更有效帮助您做数据分析。