ELISA 检测中灵敏度和检测范围的区别

 　　在进行ELISA实验测定中，有3个重要容易混淆概念：灵敏度、检测限、量程下限，了解它们在不同领域中不同作用，对于实验结果准确性和实际应用有重要意义。

　　区别

　　在ELISA实验中，灵敏度和检测限（LOD）的概念与传统临床研究中定义的概念不同。

　　在传统临床研究中，灵敏度通常是指仪器或方法在不同浓度下产生信号的能力。灵敏度是对浓度差异较小的分析物进行区分的能力的量度，表示单位浓度（或质量）变化引起的测量信号的变化量。而检测限则是能够可靠地检测到的分析物的最小量或浓度。检测限（LOD）又称检测下限或最小可检测量，定义为在一定的置信水平下能够检测到的分析物或成分的最小量或浓度。

　　1975年，国际纯粹与应用化学联合会(IUPAC)建议检测限和灵敏度如下：“灵敏度Si定义为分析校准曲线的斜率。检测限以浓度cL或定量qL表示，它源自给定分析程序可以合理确定地检测到的最小测量值xL。”该试剂盒可以在LOD水平检测蛋白质的存在，但这种检测是定性的而不是定量的。所以我们需要LOQ或“定量限”。

　　定量限（LOQ）定义为“根据统计学原理可以定量测量的分析物的最小量或浓度”。如果样品中分析物的量超过此值，则样品可以以一定的相对标准偏差定量。将浓度分为三个区域以了解LOD和LOQ之间的区别。如果实际浓度低于LOD，则视为“未检测到”；如果实际浓度介于LOD和LOQ之间，则视为“定性检测”；如果实际浓度高于LOQ，则视为“定量测量”。在此浓度下，信号足够稳定和一致，并且落在标准曲线的验证范围内，从而确保可重复性和精确度。根据信号检测理论，我们可以将由背景噪声引起的空白中测量的值用作基线，作为测量值的零点。美国化学学会环境改进委员会进一步细化了这些定义：LOD=Sb+3σ，LOQ=Sb+10σ，其中Sb是空白信号测量的平均值，σ是空白信号测量的标准偏差。

　　然而，ELISA行业通常使用“灵敏度”一词来描述检测极限，两者都指可以检测到目标物质的最低浓度或信号强度。我们提供的范围下限可以理解为LOQ，但并不完全准确，因为在此极限以下仍可能存在线性范围。在规定范围的下限以下，仍可能存在线性检测区域，但我们注明的范围是根据实际样品的实际浓度量身定制的。这种方法优先考虑了研究人员的实用性和适用性，因为它反映了与实验需求最相关的浓度。通过专注于可检测且有意义的范围，我们确保获得的数据具有更大的实用价值，使研究人员能够在研究中进行可靠的定量和定性分析。

　　不同领域的意义

　　疾病标志物诊断

　　在疾病标志物诊断中，例如使用ELISA检测前列腺癌的PSA，灵敏度决定了能否检测到最早、最轻微的PSA存在。检测范围的下限必须足够低，以覆盖疾病早期可能出现的最低PSA水平，使医生能够启动监测并及时做出临床决策。

　　药物开发

　　在药物研发中，灵敏度对于检测药物干预引起的靶蛋白浓度的哪怕是微量的变化都至关重要。检测范围的下限需要与给药后蛋白质的潜在低浓度保持一致，这对于准确评估药物的影响至关重要。

　　基础研究

　　在基础研究中，例如研究细胞分化过程中的蛋白质表达变化，灵敏度决定了是否可以检测到分化开始时低表达的蛋白质。检测范围的下限应考虑初始低水平和随后的变化，以便在整个分化过程中进行准确分析。

　　对于学术研究人员来说，清楚了解ELISA的灵敏度和检测范围的下限至关重要。彻底理解这些概念可让研究人员在疾病诊断、药物开发和基础研究等各个领域设计和进行更精确的实验和分析。