酶联免疫分析法：ELISA 和 RIA区别

  在复杂样品基质中准确定量特定蛋白质，对许多科研工作者来说是一项极其宝贵的工具。这对于许多研究领域都至关重要，例如免疫筛查、各种诊断测试的开发、食品工业中潜在过敏原的检测以及新型疫苗的生产。为了实现精准的蛋白质定量，科学家们开发了各种类型的免疫测定方法。这些方法利用高特异性抗体靶向特定蛋白质分子，从而准确检测样品中目标蛋白质的浓度。

  检测复杂样品基质中特定蛋白质的含量，对于许多科研工作者来说至关重要。这项技术在免疫筛查、诊断测试开发、食品过敏原检测和疫苗生产等领域都有广泛应用。现有的免疫测定方法种类繁多，可以利用高特异性抗体来识别并定量样品中特定蛋白质的浓度。

  什么是酶联免疫吸附法

  酶联免疫吸附法也通常被称为酶联免疫吸附试验(ELISA)。ELISA可用于通过形成酶触发的颜色变化来检测样品中存在的各种抗体或抗原。大多数酶联免疫吸附试验被称为固相测定。ELISA的4种主要类型是：

  1.直接ELISA：当样品或抗原直接固定在微孔板上时，随后结合的检测抗体会与目标蛋白结合。然后使用底物产生信号。存在的分析物量与产生的信号量之间存在直接相关性。这种方法简单快捷，但是，由于只使用一种抗体，它可能导致高背景水平，并且特异性可能较低。

  2.间接ELISA：该方法多出一个步骤来进行扩增检测过程。首先将未结合的一抗与特异性抗原结合，然后将结合的二抗与一抗结合。底物可以产生与结合到微孔板上的抗原量成正比的信号。该方法的优点是使用二抗进行扩增，但是，这可能会导致二抗引起交叉反应。该方法可用于检测内源性抗体的量。

  3.夹心ELISA：这是最流行的ELISA类型。在该方法中，使用两种特异性抗体（也称为匹配抗体对）夹住抗原。产生的信号与样品中存在的分析物的数量成正比。该方法具有最高的灵敏度和特异性，因为需要两种抗体来结合目标蛋白，因此它也可以用于复杂的样品基质。该方法可用于检测生物样品中存在的分析物的浓度。

  4.竞争性ELISA：这种方法主要用于较小的分子，因为不可能将两种抗体夹在中间。这种方法类似于夹心ELISA，但使用结合抗原与抗原竞争结合位点。因此，抗原的量越大，结合抗原可结合的结合位点就越少。产生的信号与样本中存在的蛋白质量成反比。这种方法非常适合检测激素和较小的分子。

  什么是放射免疫分析

  放射免疫分析(RIA)是一种免疫分析程序，可使用放射性同位素检测抗体和抗原复合物。这是一种体外检测方法，可提供高灵敏度和高特异性（即使在微量浓度下）。RIA基于竞争性分析方法，使用碘的伽马放射性同位素（称为碘-125(125-I)）来标记抗原。125-I同位素可以制备成具有高比活度，并提供100%的同位素丰度。

  血清中的未标记抗原与放射性抗原竞争抗体结合位点。随着未标记抗原数量的增加，更多的放射性标记抗原从抗体中被取代——这将导致抗体结合的放射性标记抗原与游离放射性标记抗原的比例降低。在该方案结束时，结合的抗原被分离出来，并使用伽马计数器检测上清液中的放射性标记游离抗原。

  ELISA和RIA之间的相似之处

  下面整理了ELISA和RIA的一些相似之处，如下：

  1.这两种程序都是基于免疫测定技术。

  2.两者都提供了高度敏感且具体的检测方法。

  3.这两种技术都依赖于抗体和抗原复合物的形成。

  4.两者都可以用于测量给定样本中存在的未知蛋白质的数量。

  5.两者在诊断多种不同类型生物的各种疾病方面都发挥着关键作用。

  ELISA与RIA之间的区别

  下面列出了ELISA和RIA之间的一些差异：

  1.ELISA使用酶检测抗体-抗原复合物，而RIA使用放射性同位素检测抗体-抗原复合物。

  2.ELISA涉及标记抗体，而RIA涉及标记抗原。

  3.与RIA检测相比，ELISA检测的灵敏度较低。

  4.ELISA程序不需要特定的实验室或训练有素的工作人员，而RIA则需要特定的实验室区域来处理放射性物质和训练有素的工作人员。

  4.ELISA不需要特殊安排，而RIA则需要对放射性物质的征用、储存和处置进行特殊安排。

  5.ELISA不涉及使用任何辐射危害，而对于RIA，任何辐射危害都需要记录和报告。

  免疫测定法在任何涉及生物分析程序的实验室中都发挥着关键作用。一些主要研究领域包括：生物制药分析、生物安全、临床诊断、食品检测和环境监测。特定蛋白质（抗原）的测量是诊断疾病过程中的基础。上文提到ELISA或RIA之类的免疫测定方法可以提供简单、快速且经济高效的分析程序。此外，特异性和灵敏度与大多数其他传统方法相当，甚至更好。自动化潜力、高通量能力、同时分析多个样本以及分析时间的显着缩短使得免疫测定程序的使用在近年来更加流行。