英文名称 : Creatine Kinase(CK) Activity Assay Kit
产品包装 : 盒装
产品规格 : 50T/48S
储存条件 : -20℃
检测方法 : 紫外分光光度法
有 效 期 : 6个月
产品组成:
试剂名称
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规格
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保存条件
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提取液
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液体 60 mL×1 瓶
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4℃保存
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试剂一
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粉剂×1 瓶
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-20℃保存
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试剂二
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粉剂×1 支
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-20℃保存
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试剂三
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粉剂×2 支
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-20℃保存
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试剂四
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粉剂×2 支
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-20℃保存
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试剂五
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液体 15 mL×1 瓶
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4℃保存
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产品说明:
肌酸激酶(Creatine Kinase,CK)(EC 2.7.3.2)也成为肌酸磷酸激酶, 主要存在于心脏、肌肉以及脑等组织中, 能可逆地催化肌酸与ATP之间的转磷酰基反应,是一个与细胞能量运转、肌肉收缩、ATP再生有直接关系的重要 激酶。
CK催化磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP,己糖激酶催化ATP与葡萄糖形成6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化6-磷酸葡萄糖与NADP+生成NADPH,导致340nm光吸收值增加,以此来表示CK酶活。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
天平、低温离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、恒温水浴锅、研钵/匀浆器、蒸馏水。
注意事项:
1. 血清的CK不稳定,采集样本后尽快测定,4℃避光保存可稳定24h。
2. 样本蛋白质含量需要另外测定。
3. OD值大于0.6可用提取液适当稀释样本,并在计算公式中相应的改变稀释倍数。
4. ΔA 空白管一般不超过0.01。
实验实例:
1、取0.1g小鼠脑加入1mL提取液进行匀浆研磨,取上清后再用提取液稀释4倍,之后按照测定步骤操作,用1mL石英比色皿测得计算ΔA测定管=A2测定-A1测定=0.638-0.149=0.489 ,ΔA空白管=A2空白-A1空白=0 ,ΔA=ΔA
测定管-ΔA空白管=0.489-0=0.489,按组织样本质量计算酶活得:
CK活性(U/g质量) =268×ΔA÷W×4(稀释倍数) =268×0.489÷0.1×4(稀释倍数) =5242.08 U/g 质量。
2、取鸭血清200μL,按照测定步骤操作,测得计算ΔA测定管=A2测定-A1测定=0.445-0.423=0.022,ΔA空白管=A2
空白-A1空白=0 ,ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管=0.022-0=0.022,按血清体积计算酶活得:
CK活性(U/mL)=268×ΔA=268×0.022=5.896 U/mL。