英文名称 : Creatine Content Assay Kit
产品包装 : 盒装
产品规格 : 50T/24S
储存条件 : -20℃
检测方法 : 可见分光光度法
有 效 期 : 6个月
产品内容:
试剂名称
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规格
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保存条件
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提取液一
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液体30mL×1瓶
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2-8℃保存
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提取液二
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液体5mL×1瓶
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2-8℃保存
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试剂一
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粉剂×2支
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-20℃保存
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试剂一稀释液
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液体15 mL×1瓶
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-20℃保存
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试剂二
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液体15mL×1瓶
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-20℃保存
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标准品
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粉剂×1 支
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2-8℃保存
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产品说明:
肌酸(Creatine)是一种含氮化合物,自然存在于脊椎动物体内,能够辅助为肌肉和神经细胞提供能量。肌酸可由精氨酸(arginine)、甘氨酸(glycine)及甲硫氨酸(methionine)三种氨基酸合成,可由人体自行合成,也可以从食物中摄取。大约95%的肌酸存在于骨骼肌中,主要存在形式为磷酸肌酸。肌酸作为一种补充剂主要通过增加肌肉质量,增强运动表现能力。
肌酸也被作为神经肌肉疾病的一种治疗药被广泛研究,它可能有助于保护神经和改善细胞生物功能状态。
肌酸酶偶联肌氨酸氧化酶,可将肌酸转化为甘氨酸、甲醛、过氧化氢,过氧化物酶催化过氧化氢氧化4-氨基安替比林偶联酚,生成有色化合物,在505nm有特征吸收峰。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、低温离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、超声破碎仪。
注意事项:
1、显色完成后,请在 10 min 之内完成检测。
2、提取液中含有蛋白沉淀剂,提取的上清液不能用于蛋白浓度的测定。若想要用蛋白浓度计算肌酸含量需要另取样本,即取相同质量的组织、同等数目的细菌或细胞,用 1.1875mLPBS(生理盐水)匀浆;取相同体积的血清(浆),用 1.206mLPBS(生理盐水)匀浆(相当于提取步骤最终样本上清液),用 BCA 法进行蛋白浓度测定。
3、如果测定吸光值低于或超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
4、试剂一、试剂二对人体有刺激性,请采取适当的防护措施。为了您的安全和健康,请穿实验服并戴乳胶手套操作
实验实例:
1、取 0.1g 小鼠肌肉加入1mL 提取液一进行匀浆研磨离心,取 0.8mL 上清后加 0.15mL 提取液二,离心取上清稀释 2 倍后按照测定步骤操作,测得计算 ΔA 测定=A 测定-A 对照=1.335-0.058=1.277,带入标准曲线y=0.0118x+0.0343,计算 x=105.3。按样本质量计算含量得:
肌酸含量(μg/g 质量)=1.044×x÷W ×2(稀释倍数)=2198.7 μg/g 质量。
2、取100μL 牛血清加入 1mL 提取液一,离心取 0.8mL 上清后加 0.15mL 提取液二,离心取上清,之后按照测定步骤操作,测得计算 ΔA 测定=A 测定-A 对照=0.596-0.069=0.527,带入标准曲线 y=0.0118x+0.0343,计算x=41.754。按照液体体积计算含量得:肌酸含量(μg/mL)=11.482×x= 479.4 μg/mL。