英文名称 ： Glutamine (Gln)Content Assay Kit
产品包装 ： 盒装
产品规格 ： 100T/48S
储存条件 ： -20℃
检测方法 ： 微量法
有 效 期 ： 6个月
产品组成 ：
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试剂名称
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规格
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保存条件
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提取液一
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液体80mL×1瓶
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2-8℃保存
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提取液二
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液体30mL×1瓶(自备)
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2-8℃保存
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试剂一
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液体2mL×1瓶
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2-8℃保存
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试剂二
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粉剂×1瓶
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-20℃保存
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试剂三
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液体5mL×1瓶
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2-8℃保存
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试剂四
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粉剂×1瓶
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-20℃保存
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试剂五
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粉剂×1支
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-20℃保存
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试剂六
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液体4mL×1瓶
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2-8℃保存
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标准品
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液体1mL×1支
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2-8℃保存
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产品说明 ：
谷氨酰胺(Glutamine)简称Gln，是谷氨酸的酰胺，是组成蛋白质的重要氨基酸之一。同时谷氨酰胺也是三羧酸循环中α-酮戊二酸的主要来源。谷氨酰胺在生物体内以游离态和结合态两种状态存在，游离的谷氨酰胺是在生物体代谢中起着重要作用，其代谢占细胞和血液循环中自由氨基酸的60%以上。
游离谷氨酰胺在谷氨酰胺酶的催化作用下转变为谷氨酸，谷氨酸脱氢酶(GDH)催化谷氨酸和NAD生成α-酮戊二酸、NADH和NH4+，在1-mPMS作用下，WST可与NADH反应，产生水溶性formazan，其在450nm处有吸收峰，据此可计算谷氨酰胺含量。
注意 ：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品 ：
酶标仪/可见分光光度计、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、氯仿、96孔板/微量玻璃比色皿、冰和蒸馏水。
注意事项：
1、如果需要测蛋白浓度，需在加提取液二之前测定蛋白浓度。
2、如果离心后待测的上清依然浑浊，可尝试加大离心转速或者延长时间，例如12000g4℃离心5min。
3、ΔA测定的测定范围在0.005-0.7之间。如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以用蒸馏水稀释样本后再次测定，如果测定吸光值小于线性范围吸光值，需要增加样本量后再次测定，注意同步计算公式。
实验实例：
1.取0.1011g草莓，将样本进行前处理，用蒸馏水稀释2倍后按照测定步骤操作，96孔板测得计算A测定=0.37，A对照=0.1，∆A测定=0.27，A标准=0.466，A空白=0.094，ΔA标准=0.372。按样本质量计算Gln含量得：谷氨酰胺含量(μmol/g质量)=ΔA测定×0.4÷ΔA标准÷W×2=5.7433μmol/g质量。
2. 取0.1081g兔肌肉，将样本进行前处理，用蒸馏水稀释2倍后按照测定步骤操作，96孔板测得计算A测定=0.349，A对照=0.147，∆A测定=0.202，A标准=0.466，A空白=0.094，ΔA标准=0.372。按样本质量计算Gln含量得：谷氨酰胺含量(μmol/g质量)=ΔA测定×0.4÷ΔA标准÷W×2=4.0186μmol/g质量。
3. 取0.5mL羊血清，将样本用蒸馏水稀释2倍后按照测定步骤操作，96孔板测得计算A测定=0.155，A对照=0.118，∆A测定=0.037，A标准=0.466，A空白=0.094，ΔA标准=0.372。按样本质量计算Gln含量得：谷氨酰胺含量(μmol/mL)=ΔA测定×0.4÷ΔA标准÷W×2=0.0796μmol/mL。
