英文名称 ：CoenzymeⅡ NADP(H) Content Assay Kit (WST colorimetry)
产品包装 ：盒装
产品规格 ：50T/24S
储存条件 ：-20℃
检测方法 ：可见分光光度法
有 效 期 ：6个月
产品组成：
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试剂名称
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规格
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保存条件
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试剂酸性提取液
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液体15 mL×1 瓶
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2-8℃保存
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碱性提取液
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液体15 mL×1 瓶
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2-8℃保存
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试剂一
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液体30 mL×1 瓶
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2-8℃保存
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试剂二
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粉剂×1 支
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-20℃保存
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试剂三
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液体12mL×1 瓶
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2-8℃保存
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试剂四 A
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粉剂×1 支
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-20℃保存
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试剂四 B
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液体 10mL×1 瓶
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2-8℃保存
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试剂五
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液体 70 mL×1 瓶
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2-8℃保存
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NADP标准品
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粉剂×1 支
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-20℃保存
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NADPH标准品
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粉剂×1 支
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-20℃保存
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产品说明：
辅酶ⅡNADP(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，NADP+和NADPH含量测定可以计算 NADP(NADPH + NADP+)含量和NADPH/NADP+比值，其变化与磷酸戊糖途径和生物合成以及抗氧化反应密切相关。 NADPH/NADP+比值不仅是细胞氧化还原态的主要标志之一，而且在PPP途径、生物合成和抗氧化代谢中具有重要调控作用。
分别用酸性和碱性提取液提取样品中NADP+和 NADPH。NADPH通过PMS的递氢作用，使氧化型噻唑蓝(MTT)还原为甲瓒，570nm下检测吸光值，从而测定NADPH含量。利用6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原 NADP+为NADPH，从而检测NADP+含量。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、低温离心机、水浴锅，研钵/匀浆器、超声破碎仪，可调式移液器、1mL玻璃比色皿、冰和蒸馏水。
注意事项：
1 、如果一次性测定样本数较多，可将试剂一、二、三按比例配成混合液。
2 、反应过程中注意避光。
3 、由于每一个测定管需要设一个对照管，本试剂盒50管可以测定24个NADP+或 NADPH。
4 、如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。同步修改计算公式。
实验实例：
1. NADP+的测定：称取0.1g冬青叶片，按提取步骤提取后按照测定步骤操作，玻璃比色皿测得吸光值后计算ΔA测定=A测定-A对照=0.052-0.036=0.016，标准曲线y1=0.333x-0.0063,根据标曲得出 x1=0.067，NADP+含量得：
NADP+ (nmol/g质量)= x1÷W=0.67 nmol/g质量。
NADPH 的测定：称取 0.1g冬青叶片，按提取步骤提取后按照测定步骤操作，玻璃比色皿测得吸光值后计算ΔA测定=A测定-A对照=0.153-0.096=0.057，标准曲线 y2=0.0914x-0.0065,根据标曲得出 x2=0.695 ，NADPH 含量得：NADPH (nmol/g质量) = x2÷W=6.947 nmol/g 质量。
2.NADP+的测定：称取0.1g小鼠肝脏，按提取步骤提取后按照测定步骤操作，玻璃比色皿测得吸光值后计算ΔA测定=A测定-A对照=0.042-0.028=0.014，标准曲线 y1=0.333x-0.0063,根据标曲得出x1=0.061 ，NADP+含量得：NADP+ (nmol/g质量)= x1÷W=0.61nmol/g 质量。
NADPH 的测定：称取0.1g小鼠肝脏，按提取步骤提取后按照测定步骤操作，玻璃比色皿测得吸光值后计算ΔA测定=A测定-A对照=0.19-0.063=0.127标准曲线 y2=0.0914x-0.0065,根据标曲得出 x2=1.461，NADPH 含量得：NADPH (nmol/g 质量) = x2÷W=14.61 nmol/g质量。
3.NADP+的测定：取0.1mL牛血清，按提取步骤提取后按照测定步骤操作，玻璃比色皿测得吸光值后计算ΔA测定=A测定-A对照=0.048-0.030=0.018，标准曲线 y1=0.333x-0.0063,根据标曲得出 x1=0.073，NADP+含量得： NADP+ (nmol/mL)= 11×x1=0.803 nmol/mL。
NADPH 的测定：取0.1mL牛血清，按提取步骤提取后按照测定步骤操作，玻璃比色皿测得吸光值后计算ΔA测定=A测定-对照=0.056-0.032=0.024，标准曲线 y2=0.0914x-0.0065,根据标曲得出x2=0.334 ，NADPH含量得： NADPH (nmol/mL)= 11×x2=3.671nmol/mL。
