英文名称 : Protein Disulfide Bond Content Assay Kit
产品包装 : 盒装
产品规格 : 100T/48S
储存条件 : 2-8℃
检测方法 : 微量法
有 效 期 : 6个月
产品组成:
试剂名称
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规格
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保存条件
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提取液一
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液体 40mL×1瓶
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2-8℃保存
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提取液二
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液体40mL×1瓶
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2-8℃保存
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试剂一
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液体120mL×1瓶
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2-8℃保存
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试剂二
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液体20mL×1瓶
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2-8℃保存
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试剂三
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液体7mL×1瓶
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2-8℃保存
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试剂四
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液体1mL×1支
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2-8℃保存
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标准品
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粉剂×1 支
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2-8℃保存
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产品说明:
巯基的存在使得蛋白质能够进行二硫键的形成,从而维持分子的稳定性和功能性。此外,巯基还参与到氧化 还原反应中,具有重要的生物学作用。在细胞内, 巯基含量的变化与多种疾病的发生和进展密切相关,因此巯基 也成为了生物医学领域中的重要研究对象。
本试剂盒测定的是蛋白质中的游离巯基含量。一定条件下巯基会发生亲核反应,即巯基与5,5’-二硫代-双-硝基苯甲酸(DTNB)反应,生成黄色化合物,在 412nm处有最大吸收峰,据此可以计算蛋白质游离巯基含量。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、低温离心机、研钵/匀浆器、丙酮(AR)、蒸馏水。
注意事项:
1. 若样本ΔA测定<0.01,可适当增大样本量后测定,注意同步修改空白管和标准管及计算公式;若样本ΔA测定>1.5 ,可用试剂一稀释沉淀溶解液后测定,注意同步修改计算公式中的稀释倍数。
2.可使用BCA法测定蛋白浓度。
实验实例:
1、取 100μL马血清,按照测定步骤操作,用96孔板测得ΔA测定=A测定-A对照=0.113-0.047=0.066 ,ΔA标准=A 标准-A 空白=0.417-0.105=0.312,按样本液体体积计算蛋白质游离巯基含量得:
蛋白质游离巯基含量(μmol/mL)=2.5×ΔA 测定÷ΔA 标准×F =0.529μmol/mL。
2 、取0.1036g鼠肝,按照测定步骤操作,用96孔板测得ΔA测定=A测定-A对照=0.261-0.105=0.156,ΔA 标准=A 标准-A 空白=0.417-0.105=0.312,按样本质量计算蛋白质游离巯基含量得:
蛋白质游离巯基含量(μmol/g质量)=0.25×ΔA测定÷ΔA 标准÷W×F =1.207μmol/g质量。
3、取 0.1078g 黄豆粉,沉淀溶解液用试剂一稀释2倍后,按照测定步骤操作,用96孔板测得ΔA测定=A测定- A对照=0.123-0.070=0.053,ΔA标准=A标准-A空白=0.417-0.105=0.312,按样本质量计算蛋白质游离巯基含量得:蛋白质游离巯基含量(μmol/g质量)=0.25×ΔA测定÷ΔA标准÷W×F =0.788μmol/g质量。