英文名称 : α-Mannosidase(α-man)Activity Assay kit
产品包装 : 盒装
产品规格 : 50T/24S
储存条件 : -20℃
检测方法 : 可见分光光度法
有 效 期 : 6个月
产品组成:
试剂名称
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规格
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保存条件
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提取液一
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液体60mL×1瓶
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2-8℃保存
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试剂一
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液体50mL×1瓶
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2-8℃保存
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试剂二
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粉剂×2支
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-20℃保存
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试剂三
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粉剂20mL×1瓶
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-20℃保存
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试剂四
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液体3mL×1瓶
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2-8℃保存
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标准品
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液体1mL×1支
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-20℃保存
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产品说明:
α-man 分布广泛、种类繁多,在真核生物胞质、内质网、高尔基体、溶酶体中都有发现,不同种类、功能的 α-man 共同参与 N-聚糖的修饰过程。α-man 和特定底物发生反应,其生成物在 405nm 处有特征吸收峰,根据吸光度的变化率可计算出 α-man 活性。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、低温离心机、恒温培养箱/水浴锅、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、匀浆器/研钵、冰和 蒸馏水。
注意事项:
如果测定吸光值A>1.5或ΔA>1,建议稀释样本后再测定, 计算公式中乘以稀释倍数;如果测定吸光值较低或接近空白OD值, 建议增加样本量后再进行测定。
实验实例:
1 、称取 0.1 g 兔子肝脏组织,加入 1 mL 提取液, 冰浴匀浆, 12000 g ,4℃条件下离心 10 min;取上清置于冰上 待测。使用 1mL 玻璃比色皿按照测定步骤操作,计算 ΔA=A 测定管-A 对照管=0.404-0.309=0.095 ,标准曲线 y=2.0294x+ 0.0092,计算 x=0.0422 ,按公式计算活性:
α-甘露糖苷酶酶活(U/g 质量) = x×0.1÷W×F = 0.0422U/g质量
2 、称取 0.1 g 草莓果肉,加入1 mL提取液, 冰浴匀浆,12000 g ,4℃条件下离心10 min;取上清置于冰上待测。 使用1mL玻璃比色皿按照测定步骤操作,计算 ΔA=A测定管-A 对照管=0.113-0.091=0.022 ,标准曲线 y=2.0294x+ 0.0092,计算 x=0.0063 ,按公式计算活性:
α-甘露糖苷酶酶活(U/g 质量) = x×0.1÷W×F = 0.0063 U/g质量