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一、基本信息 |
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细胞名称 |
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细胞品牌 |
纪宁生物 |
细胞规格 |
1×10⁶cells/T25培养瓶 |
细胞简介 |
该细胞来源于一雌性猕猴的肾组织。2000年由中国科学院昆明细胞库建立。 |
细胞英文 |
MMK2细胞 |
种属来源 |
恒河猴 |
组织来源 |
肾 |
疾病特征 |
正常 |
细胞形态 |
上皮细胞样 ;多角形 |
生长特性 |
贴壁生长 |
培 养 基 |
M-199: with Earle's Balanced Salts Solution (EBSS) 15%NBS |
生长条件 |
气相:空气,95% ;二氧化碳,5% ; 温度:37℃ |
传代方法 |
1:2至1:6,每周2次 |
冻存条件 |
90% 完全培养基+10% DMSO,液氮储存 |
支原体检测 |
阴性 |
发货方式 |
快递运输(特殊情况的另处理) |
供应范围 |
仅限于科研实验使用,不得用于其他用途 |
二、接受后处理 |
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处理1 |
收到细胞后,请检查是否漏液 ,如果漏液,请拍照片发给我们 |
处理2 |
请先在显微镜下确认细胞生长状态,去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h |
处理3 |
弃去T25瓶中的培养基,添加 6ml本公司附带的完全培养基 |
处理4 |
如果细胞密度达80%-90%请及时进行细胞传代,传代培养用6ml本公司的完全培养基 |
处理5 |
接到细胞次日,请检查细胞是否污染,若发现污染或疑似污染,请及时与我们取得联系 |
三、细胞操作 |
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复苏细胞 |
将含有1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)第二天换液并检查细胞密度。 |
细胞传代 |
如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养: 1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2.加 1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 3.将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 4.4 min 1000rpm离心去掉上清。加1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加入血清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO终浓度为10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存1ml 细胞悬液,注意冻存管做好标识。 |
细胞冻存 |
待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类: 1.弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆脱落后,加入1ml含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。 2.4 min 1000rpm离心去掉上清。加1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加入血清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO终浓度为10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存1ml 细胞悬液,注意冻存管做好标识。 3.将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
注意事项 |
1.收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象发生请及时和我们联系。 2.仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等,确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题,责任由客户自行承担。 3.用75%酒精擦拭细胞瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落,将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均会贴壁,若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力,如果证实细胞活力正常, 请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养;如果染色结果显示细胞无活力,请拍下照片及时和我们联系,信息确认后我们为您再免费寄送一次。 4.静置细胞贴壁后,请将细胞瓶内的培养基倒出,留 6~8mL 维持细胞正常培养,待细胞汇合度80%左右时正常传代。 5.请客户用相同条件的培养基用于细胞培养,培养瓶内多余的培养基可收集备用,细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合,使细胞逐渐适应培养条件。 |
四、售后服务 |
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细胞予重发 |
1.细胞运输中遭遇的各种问题,细胞丢失瓶身破损、培养液严重漏液等,重发。 2.收到细胞未开封,如出现污染状况,重发。 3.收到细胞3天内,发现污染问题,经核实后,重发。 4.常温发货的细胞静置2小时后,干冰冻存发货的细胞复苏2天后,绝大多数细胞未存活,经核实后,重发。 5.常温发货的细胞静置22小时并且未开封或干冰冻存发货的细胞复苏2天后,出现污染,经核实后,重发。 6.细胞活性问题,请在收到产品3天内给我们提出真实的实验结果,用台盼蓝染色法鉴定细胞活力,经核实后,重发。 |
细胞不重发 |
1.客户操作造成细胞污染,不重发。 2.客户严重操作失误致细胞状态不好,不重发。 3.非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好,不重发。 4.细胞状态不好,未提供真实清晰的培养前3天的细胞状态照片,不重发。 5.细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的,不重发。 6.收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的,不重发。 |
五、特别说明 |
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上海纪宁生物客户购买本公司的细胞过程中,有任何技术问题或实验问题,都可以拨打我们的免费服务电话15800441226 / 021-54721350,我们随时给予技术中/实验中的免费解答。 |