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编号 |
成分 |
规格 |
试剂一 |
2×Probe qPCR MagicMix |
500μL(本色盖) |
试剂二 |
荧光PCR专用模板稀释液 |
1mL(黄盖) |
试剂三 |
戊糖片球菌qPCR引物混合液 |
100μL(白盖) |
试剂四 |
戊糖片球菌qPCR探针 |
50μL(棕色管) |
试剂五 |
戊糖片球菌探针法qPCR阳性对照(1×10E8/μL) |
50μL(红盖) |
使用手册 |
1 份 |
成份 |
N+2 个样品管 |
PCR 阴性对照管 |
标准曲线样品管(2-7管) |
2×Probe qPCR MagicMix |
10μL |
10μL |
各10μL |
戊糖片球菌qPCR探针 |
1μL |
1μL |
各1μL |
戊糖片球菌探针法qPCR引物混合液 |
2μL |
2μL |
各2μL |
N+2个待测DNA模板 |
7μL |
-- |
-- |
超纯水 |
-- |
7μL |
-- |
第7步所得标准曲线样品稀释液(2-7号) |
-- |
-- |
各7μL(2号样到2号管,3号样到3号管…) |
过程 |
温度 |
时间 |
预变性 |
95℃ |
3 min |
PCR反应40个循环 |
95℃ |
15 sec |
60℃ |
1 min(采集FAM通道的荧光信号) |
13. 如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照 Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct 值应该小于或等于 30。对待测样品,如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性,如果小于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间,则重复一次。若重复结果 Ct值小于 40,扩增曲线有明显起峰,该样本判断为阳性,否则为阴性。