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成分 |
N+2个制备所得样品 |
qRT-PCR 阴性对照 |
qRT-PCR 阳性对照 (2-7 管) |
2×qRT-PCR 缓冲液 |
10μL |
10 μL |
各 10 μL |
猪环曲病毒染料法qRT-PCR 引物混合物 |
2 μL |
2 μL |
各 2 μL |
50×ROX (见注) |
0.4μL |
0.4μL |
各 0.4μL |
样品制备所得 RNA 模板 (来于第 8 步) |
5.6μL |
-- |
-- |
稀释所得 6 个阳性对照 (来于第 6 步) |
-- |
-- |
各 5.6μL(2 号样到 2 号 管,3 号样到 3 号管…) |
超纯水 |
-- |
5.6μL |
-- |
10×qRT-PCR 酶混合液 |
2μL |
2μL |
2μL |
成分 |
N+2个制备所得样品 |
qRT-PCR 阴性对照 |
qRT-PCR 阳性对照 (2-7 管) |
2×qRT-PCR 缓冲液 |
10μL |
10 μL |
各 10 μL |
猪环曲病毒染料法qRT-PCR 引物混合物 |
2 μL |
2 μL |
各 2 μL |
50×ROX (见注) |
0.4μL |
0.4μL |
各 0.4μL |
样品制备所得 RNA 模板 (来于第 8 步) |
5.6μL |
-- |
-- |
稀释所得 6 个阳性对照 (来于第 6 步) |
-- |
-- |
各 5.6μL(2 号样到 2 号 管,3 号样到 3 号管…) |
超纯水 |
-- |
5.6μL |
-- |
10×qRT-PCR 酶混合液 |
2μL |
2μL |
2μL |
过程 |
温度 |
时间 |
RT(逆转录) |
50℃ |
15-30 min |
预变性 |
95℃ |
5 min |
Qrt-PCR反应 40 个循环 |
95℃ |
15 sec |
58℃ |
1 min,(采集FAM通道的荧光信号) |
|
按仪器预设程序进行溶解曲线分析 |