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编号 |
成分 |
规格 |
试剂一 |
5×双酶一管式 RT-PCR Buffer |
200 μL(橘黄盖) |
试剂二 |
MMLV-Taq Mix |
75 μL(红盖) |
试剂三 |
超纯水 |
1 mL(亮黄盖) |
试剂四 |
禽呼肠孤病毒 RT-PCR 引物混合液 |
100 μL(白盖) |
试剂五 |
禽呼肠孤病毒 RT-PCR 阳性对照(1×10E8 /μL) |
50 μL(黄盖) |
试剂六 |
使用手册 |
1 份 |
成份 |
N+2 个 样品管 |
RT-PCR 阴性对照 |
RT-PCR 阳性对照 |
5×双酶一管式RT-PCR Buffer |
各 4 μL |
4 μL |
4 μL |
禽呼肠孤病毒 RT-PCR 引物混合液 |
各 2 μL |
2μL |
2μL |
N+2 个制备的 RNA 样品 |
各 12.5μL |
-- |
-- |
超纯水 |
-- |
12.5μL |
-- |
禽呼肠孤病毒 RT-PCR 阳性对照的 1000倍稀释液 |
-- |
-- |
12.5μL |
MMLV-Taq Mix |
1.5 μL |
1.5 μL |
1.5 μL |
过程
温度
时间
逆转录
42℃
30 min
预变性
95℃
5 min
PCR 反应35个循环
95℃
30 sec
58℃
30 sec
72℃
20 sec
最后延伸
72℃
7 min
三、电泳检测:
5. 琼脂糖电泳检测扩增效果。如果阴性对照有扩增产物或阳性对照无扩增产物,则说明实验失败,需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有扩增产物、阳性对照必须有预期条带出现,才有必要分析样品的实验结果,如果有预期片段大小的扩增产物则为阳性,如果无则为阴性。