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兔脊髓神经元细胞
基本信息
产品名称 ： 兔脊髓神经元细胞
产品品牌 ： 纪宁生物
组织来源 ： 脊髓组织
产品规格 ： 5×105cells/T 25细胞培养瓶
细胞简介
兔脊髓神经元细胞分离自脊髓组织；脊髓是细细的管束状的神经结构，位于脊柱的椎管内且被脊椎保护；是源自脑的中枢神经系统延伸部分。中枢神经系统的细胞依靠复杂的联系来处理传递信息。脊髓的主要功能是传送脑与外周之间的神经信息。人和脊椎动物中枢神经系统的一部分，在椎管里面，上端连接延髓，两旁发出成对的神经，分布到四肢、体壁和内脏。脊髓的内部有一个H 形(蝴蝶型)灰质区，主要由神经细胞构成；在灰质区周围为白质区，主要由有髓神经纤维组成；脊髓是许多简单反射的中枢。
脊髓两旁发出许多成对的神经(称为脊神经)分布到全身皮肤、肌肉和内脏器官。脊髓是周围神经与脑之间的通路，也是许多简单反射活动的低级中枢。按脊神经的出入可把脊髓也分为相应的31节，31对脊神经就是由不同的脊椎发出的。神经系统最基本的结构和功能单位是神经元，即神经细胞，其大小和外观在中枢神经系统中差异很大。
但都具有胞体和树突、轴突。胞体又叫核周体，内含神经丝、微管、内质网、游离核糖体和一个有明显核仁的核。一些大神经元突起的粗面内质网可用Nissl染色显示，在光镜下是灰蓝色斑块状，称为尼氏小体。树突和轴突是神经元的突起，能在神经元之间传递电冲动，突起的大小和形态各不相同，很难用常规的显微镜鉴别。
脊髓组织内含有大量胶质细胞，神经元含量少，分离纯化难度大，且脊髓神经元细胞是高度分化的终末细胞，不能分裂增殖，培养要求高。刚接种的脊髓神经元呈圆形，体积小，透亮，无突起。培养2-3d，可见胞体增大，突起增多延长；培养6-7d，细胞体大饱满，突起明显增加延长并交织成网，光晕明显，立体感强。培养20d后，死 亡细胞明显增加，细胞出现内空泡，突起粗细不均，甚至脱壁，发生细胞崩解。
方法简介
纪宁生物实验室分离的兔脊髓神经元细胞采用胶原酶-胰酶联合消化法、神经元专用培养基培养筛选结合化学试剂抑制法制备而来，细胞总量约为5×105cells/瓶 。
质量检测
纪宁生物实验室分离的兔脊髓神经元细胞经β-Tubulin-Ⅲ免疫荧光鉴定，纯度可达90% 以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养信息
培 养 基 ： 含B-27 Supplem ent、Penicillin、Streptom ycin等
换液频率 ： 每2-3天换液一次
生长特性 ： 贴壁
细胞形态 ： 神经元细胞样
传代特性 ： 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群
传代比例 ： 不传代
消 化 液 ： 0.25% 胰蛋白酶
培养条件 ： 气相：空气，95% ；C O2，5%
兔脊髓神经元细胞体外培养周期有限；建议使用纪宁生物配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
细胞培养状态
发货时发送细胞电子版照片
使用方法
兔脊髓神经元细胞是一种贴壁细胞，细胞形态呈神经元细胞样，在纪宁生物技术部标准操作流程下，细胞属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群；建议您收到细胞后尽快进行相关实验。
客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作
1.取出T 25细胞培养瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。
2.静置后，显微镜下观察细胞状态，拍照记录细胞的贴壁情况，漂浮的细胞需离心收集后在离心管消化(脱落细胞处理方式)，贴壁细胞也需消化后与脱落的细胞合并一起后重新接种。
3.神经元细胞消化
1) 将培养瓶内所有培养基转入无菌离心管，离心收集细胞(1200rpm5min)，细胞沉淀按照下面脱落细胞处理方式处理该部分细胞。
2) 培养瓶内贴壁细胞，用PBS(37℃预热)清洗细胞一次，将PBS收集到步骤1的离心管中，
不要直接丢弃。
3) 添加0.125% 胰蛋白酶消化液(0.25% 胰酶用PBS稀释一倍)1m L至培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，放入4℃冰箱消化细胞3-5min(或者37℃温浴1min )。
4) 倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml完全培养基终止消化(稀释法终止消
化，培养基用量不低于5ml)。
5)用吸管轻轻吹打混匀、分散细胞，1200rpm 5min 离心去除残留胰酶。
6) 去掉上清，加入适量的完全培养基混匀(可补加1% FB S，促进贴壁)，接种于孔板中(提前多聚赖氨酸包被孔板)。
7) 待细胞贴壁后可用于后续相关实验。
4. 细胞收货脱落
1) 收集所有细胞悬液，1200rpm 5min离心，保留沉淀。
2) 添加0.125% 胰蛋白酶消化液(0.25% 胰酶用PBS稀释一倍)1m L至离心管中，轻柔重悬沉淀，放置4℃冰箱静置3-5min )。
3) 消化完向离心管内加入5ml完全培养基终止消化。
4) 经1200rpm ，离心5min，丢弃上清，用5ml完全培养基(可补加1% FBS，促进贴壁)重悬沉淀，接种于新的培养瓶内。
5) 接种后绝对静置24-48小时， 48小时后观察，否则细胞容易聚团。
5. 细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性，贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，避免细胞因没贴好影响实验；包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ （2-5μg/cm2） ，多聚赖氨酸PLL（0.1m g/ml），明胶（0.1% ），依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。
注意事项
1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
2. 在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。
3. 传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和纪宁生物技术部沟通。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，详尽告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。
