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活性氧包括超氧阴离子、羟基自由基、过氧化氢、单线态氧等，这些粒子均十分微小。由于存在未配对的自由电子，活性氧的化学性质十分活跃。活性氧往往是生物生化过程中的一种副产品，当其过量时，机体内的活性氧会对细胞和基因结构造成损坏，引发多种疾病，如细胞毒性、衰老、癌症等。超氧阴离子是其他几种活性氧的源头，超氧化物歧化酶能够清除机体中过量的超氧阴离子，它能够催化超氧阴离子发生歧化反应，产生氧气和过氧化氢，具有抗炎、抗病毒、抗衰老等作用。
现有的测定超氧化物歧化酶活性的方法主要是黄嘌呤氧化酶-NBT法、 肾上腺素自氧化法、Marklund邻苯三酚法、化学发光法等。但是黄嘌 呤氧化酶-NBT法中，NBT产物甲臜水溶性差，需要加入助溶剂增加水溶 性，因此此法应用有一定的限制。肾上腺素自氧化法和Marklund邻苯 三酚法是根据肾上腺素和邻苯三酚在碱性条件下自氧化，产生超氧阴离子和有色物质，根据有色物质的含量变化测定超氧化物歧化酶活性 ，但是有色物质不稳定，存在时间短，因此测定有误差，重现性较差 。化学发光法是通过使用化学发光剂使体系产生化学发光，间接的检 测超氧阴离子的方法，该方法由于发光时间短暂，测定困难并易产生误差，重现性较差。
CN201210341599.6提供一种测定超氧化物歧化酶活性的方法，该方法包括以下步骤：
步骤a、超氧阴离子产生体系缓冲溶液的配制
配制浓度为50毫摩尔/升的碳酸氢铵缓冲溶液，调节pH值为9.3；
步骤b、标准品的配制
用步骤a中的碳酸氢铵缓冲溶液将标准品配成浓度为50微摩尔/升的标 准溶液，所述的标准品为2-(4-碘苯)-3-(4-硝基苯)-5-(2'4-二磺基苯 )-2H-四氮唑钠盐，能和超氧阴离子反应产生水溶性甲臜染料；
步骤c、对照品、样品和空白样品的制备
对照品的制备：反应总体积160微升，先加入40微升2毫摩尔/升乙二胺 四乙酸二钠盐，加入40微升生理盐水，加入40微升50微摩尔/升的2-( 4-碘苯)-3-(4-硝基苯)-5-(2'4-二磺基苯)-2H-四氮唑钠盐，最后加入40微升1毫摩尔/升邻苯三酚水溶液，37℃反应12分钟后，作为对照品，供内置紫外可见分光光度计的酶标仪测定；
样品的制备：反应总体积160微升，先加入40微升2毫摩尔/升乙二胺四乙酸二钠盐，加入40微升3.12毫克/升超氧化物歧化酶标准品溶液（生理盐水溶解的），加入40微升50微摩尔/升的2-(4-碘苯)-3-(4-硝基苯)-5-(2'4-二磺基苯)-2H-四氮唑钠盐，最后加入40微升1毫摩尔/升邻苯三酚水溶液，37℃反应12分钟后，作为样品，供内置紫外可见分光 光度计的酶标仪测定；
空白样品的制备：反应总体积160微升，先加入40微升2毫摩尔/升乙二 胺四乙酸二钠盐，加入40微升3.12毫克/升超氧化物歧化酶标准品溶液 （生理盐水溶 解的），加入40微升50微摩尔/升的2-(4-碘苯)-3-(4-硝基苯)-5-(2' 4-二磺基苯)-2H-四氮唑钠盐，最后加入40微升水溶液，37℃反应12分钟后，作为空白样品，供内置紫外可见分光光度计的酶标仪测定；
步骤d、对照品、样品和空白样品的检测
对照品检测：以96孔板为载体，在内置紫外可见分光光度计的酶标仪中进行测定，设定紫外-可见检测波长为450纳米，对步骤c制备的对照品进行测定，得到对照品的吸光度值A对照品；
样品检测：以96孔板为载体，在内置紫外可见分光光度计的酶标仪中 进行测定，设定紫外-可见检测波长为450纳米，对步骤c配制的样品进行测定，得到样品的吸光度值A样品；
空白样品检测：以96孔板为载体，在内置紫外可见分光光度计的酶标仪中进行测定，设定紫外-可见检测波长为450纳米，对步骤c配制的空白样品进行测定，得到空白样品的吸光度值A空白样品；
步骤e、超氧化物歧化酶的活性的计算
超氧化物歧化酶对超氧阴离子的清除率按照以下公式计算：
I样品=[A对照品-（A样品-A空白样品）]/A对照品×100%
式中，I为超氧化物歧化酶对超氧阴离子的清除率；
A对照品为对照品中2-(4-碘苯)-3-(4-硝基苯)-5-(2'4-二磺基苯)-2H-四氮 唑钠盐的产物水溶性甲臜的吸光度值，无量纲；
A样品为样品中2-(4-碘苯)-3-(4-硝基苯)-5-(2'4-二磺基苯)-2H-四氮唑 钠盐的产物水溶性甲臜的吸光度值，无量纲；
A空白样品为空白样品中2-(4-碘苯)-3-(4-硝基苯)-5-(2'4-二磺基苯)-2H-四 氮唑钠盐的产物水溶性甲臜的吸光度值，无量纲；
超氧化物歧化酶活性的计算公式如下：
超氧化物歧化酶活性=I/(1–I)
根据测得的对照品、样品和空白样品中2-(4-碘苯)-3-(4-硝基苯)-5- (2'4-二磺基苯)-2H-四氮唑钠盐的产物水溶性甲臜的吸光度值A对照品、A样品和A空白样品，经计算得到0.78毫克/升超氧化物歧化酶标准品对超氧阴离子的清除率为42%，进而得出超氧化物歧化酶标准品的活性为5.8U/μg。
一种利用结晶法分离提纯超氧化物歧化酶的方法，其特征在于步骤如下：
步骤1：利用超声破碎仪将细菌发酵培养液破碎后，离心取上清，用盐酸调节蛋白 质溶液pH值至酸性，0℃-4℃静置1h-3h后，离心取上清，超滤浓缩后得到蛋白质溶液；
步骤2：将沉淀剂溶解在0.1-5mM，pH值为3.0-5.5的柠檬酸溶液中，与蛋白质溶液 按1:1体积比混合后，加入10-200μL籽晶，置于控温箱中，在4℃-20℃中搅拌结晶；所述沉淀 剂为PEG8000，浓度为20-80mg/mL；
步骤3：将结晶完成后的溶液离心后取沉淀，所得沉淀即为超氧化物歧化酶晶体混合物；
步骤4：加入超氧化物歧化酶晶体清洗溶液，缓慢搅拌混匀后，离心弃上清，重复该 过程多次以彻底清洗晶体，得到超氧化物歧化酶晶体；所述晶体清洗溶液为20-100mg/mL的 PEG8000溶液；
步骤5：将所得晶体冻干，得到白色粉末状超氧化物歧化酶成品，或不冻干，直接作为晶体制剂应用。
对于步骤4得到的超氧化物歧化酶晶体溶解后的溶液取代步骤2的蛋白质溶液，采用与步骤2相同的结晶条件重复结晶多次，使所制得的超氧化物歧化酶晶体纯度更高。
[1] CN201210341599.6 一种测定超氧化物歧化酶活性的方法
[2] [中国发明] CN201810289241.0 一种利用结晶法分离提纯超氧化物歧化酶的方法