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无动物源性胰蛋白酶/EDTA是一种重组酶,可以替代动物胰腺来源消化塑料培养瓶中培养的贴壁细胞。本产品比天然胰蛋白酶制剂具有更高的特异性,适用于无血清培养体系中贴壁细胞的消化。本产品溶剂为PBS/1mM EDTA,是即用型产品。本品不含酚红。
1.将无动物源性胰蛋白酶/EDTA和完全培养基于37℃复温。
2.将待消化的培养瓶中培养基上清吸弃。
3.用5 ml无钙镁离子的PBS清洗细胞层并弃去洗液。
4.在培养瓶中加入适量的无动物源性胰蛋白酶/EDTA(例:75cm2培养瓶中加入5ml消化液),保证贴壁细胞层完全被消化液浸没。
5.37℃孵育,直至细胞被消化下来(使用倒置显微镜观察,保证细胞完全被消化下来)可以轻拍瓶底,帮助细胞解离。
6.在培养瓶中加入5-10ml的完全培养基,各个角度倾斜培养瓶冲洗,然后将液体转入15ml离心管。
7.100g离心5-10min。
8.去上清后用2-5ml复温的完全培养基重悬。
9.确定细胞浓度及活率。
10.根据细胞特性以一定的浓度接种细胞,即可进行培养。