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玻璃酸酶又名透明质酸酶,在哺乳动物的睾丸里含量很丰富,能水解透明质酸,使其粘滞性明显下降,有利于受精时精子进入卵子,也存在于精子、颌下腺、蜂毒、蛇毒、皮肤、脾脏、水蛭及细胞的溶酶体中。药用玻璃酸酶为白色或微黄色粉末,无气味,易溶于水,不溶于 丙酮、乙醚、乙醇等有机溶剂。生化制药主要用牛、羊睾丸为原料进行提取制备。
一种玻璃酸酶的提取方法,采用酸液提取和硫酸铵盐析得玻璃酸酶粗品,粗品再经透析、热原处理、冻干得玻璃酸酶精品。具体步骤如下:
1提取:
将羊睾丸除内外皮层及付睾丸,绞成糜浆。称取糜浆,按每1kg 糜浆加酸液1.0-1.5L的比例,加酸液搅拌,浸出4小时后,将浸出液过滤,滤液调pH3.0~4.5。
取滤渣,按每1kg开始加入的糜浆加酸液0.2-0.3L的比例,加酸液搅拌1小时后,再次过滤,滤液调pH3.0~4.5。
2粗制:
合并两次过滤液,在不断搅拌下,以每1L加硫酸铵200-230克的比例,加入固体硫酸铵,搅拌溶解,静置12小时,过滤,留固体。 量取滤液,在不断搅拌下,按1L滤液加硫酸铵270-300克的比例,加入固体硫酸铵,搅拌溶解,静置12小时,过滤,合并两次固体, 得粗品。
3精制:
3.1透析
粗品溶于少量水中,调pH3.5~5.0,以透析袋包扎,在磷酸盐- 柠檬酸缓冲液中透析24小时。
3.2热原处理:
将透析液离心20-60分钟,转速3000-4000r/mi n,过滤,将滤液放冰浴中冷却,加入滤液0.1体积的15%磷酸三钠(Na3PO4·12H2O) 溶液,在不断搅拌下,缓缓加入滤液0.06体积的20%醋酸钙 (Ca(CH3COO)2·H2O)溶液,并以NaOH溶液调pH8-9,离心,时间 20分钟~60分钟,转速3000-4000r/min。收集上清液,之后上清液 调pH6.5~7.0。
3.3冻干
将滤液冷冻干燥,即得无热原的玻璃酸酶精品。
玻璃酸是存在于人体组织间基质中的粘多糖,能限制细胞外液的扩散。玻璃酸酶作用于玻璃酸分子中的葡萄糖胺键,使之水解和解聚,降低体液的粘度, 使细胞间液易流动扩散,故可使局部积贮的药液、渗出液或血液扩散,加速药物吸收,减轻局部组织张力和疼痛,并有利于水肿、炎性渗出物的吸收、消散。本品属关节软骨的基本成分之一,具有营养、保护和维持关节软骨的功能。
用于促使眼局部积贮的药液、渗出液或血液的扩散,促使玻璃体混浊的吸收、预防结膜化学烧伤后睑球粘连,并消除有关的炎症反应; 用于骨关节炎的治疗。
[1] CN201210598018.7 一种玻璃酸酶的提取方法
[2] 注射用玻璃酸酶说明书