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瑞氏色素是酸性染料伊红(Eosin)和碱性染料亚甲蓝(Methylene Blue)组成的复合染料,对原生质的染色有很好的区别作用。各种细胞成分化学性质不同,对各种染料的亲和力也不一样,如血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结合,染粉红色,称为嗜酸性物质;细胞核蛋白、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞胞质为酸性,与碱性染料结合后,染紫蓝色或蓝色,称为嗜碱性物质;中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合,染淡紫红色,称为嗜中性物质。
原始红细胞、早幼红细胞胞质、核仁含较多酸性物质,染成较浓厚的蓝色;中幼红细胞既含酸性物质,又含碱性物质,染成红蓝色或灰红色;完全成熟红细胞,酸性物质彻底消失后,染成粉红色。瑞氏染液为蓝色澄明液体,有甲醇特异香味,主要由美蓝、伊红、甲醇等组成,其中甲醇的作用是溶解美蓝和伊红以及固定细胞形态。
瑞氏色素,直接使用,无需任何配制过程,染液中加微量中性甘油,防止甲醇挥发或氧化,同时也可使血细胞染色较清晰。经常用于血液和细胞涂片、骨髓细胞涂片、细菌染色。细胞质呈红色,细胞核及细菌呈蓝色,嗜酸性颗粒呈橘红色。
瑞氏色素密度0.8,熔点-98 ºC,沸点65 ºC,折射率1.52-1.522,闪点11 ºC,瑞氏色素是一种复合的中性染色剂,由曙红和一种氧化的并除去部分甲基的亚甲蓝组成的化合物。它对于原生质的染色,具有分别嗜中性、嗜碱性和嗜酸性部分 的作用。特别使用于血液的染色。溶于乙醇,不溶于水。最大吸收波长640(522)nm。
PH对细胞染色有影响。细胞各种成分均不蛋白质,由于蛋白质系两性电解质,所带电荷随溶液PH而定,在偏酸性环境中下在电荷增多,易与伊红结合,染色偏红;在偏三性环境中负电荷增多,易与美蓝或天青结合,染色偏蓝。因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感,染色用正经片必须清洁,无酸碱污染。医学教育`网搜集整理配制顼特液必须用优质甲醇,稀释染色必须用缓冲液,冲洗用水应近中性,否则可导致各种细胞染色反应异常,以致识别困难,甚至造成错误。
瑞氏色素
1、常规方法制备血液涂片或骨髓涂片或细菌涂片,待涂片自然干燥。
2、将血液涂片或骨髓涂片置于染色架上。
3、滴加适量瑞氏色素覆盖涂片,室温染色 1~2min。
4、涂片滴加等量磷酸盐缓冲液,轻轻晃动玻片或采用其他方式混合,使磷酸盐缓冲液与瑞氏色素混匀,室温静置 3~10min。
5、用自来水或蒸馏水从玻片一端轻轻冲洗。(注:也可先用磷酸盐缓冲液冲洗玻片,时间控制在 30s左右。)
6、干燥。
7、镜检:先用低倍镜观察血涂片,再用油镜。
显微镜涂片用染色剂,如血、骨髓的染色,血液中寄生虫染色(原虫、利什曼原虫、血丝虫等)。生物染色。显微镜涂片用染色剂,如血、骨髓的染色、血液中寄生虫染色(原虫、利什曼原虫、血丝虫等)。
1、血液涂片或骨髓涂片应厚薄均匀,以免影响染色效果。
2、涂片染色中,请勿先去除染液或直接对涂片用力冲洗。不能先倒掉染液,以免染料沉着于涂片上。
3、染色液可重复使用,但不能多次重复,若有沉淀物应过滤后使用。
4、染色过深可用甲醇或酒精适当脱色,最好不复染。
5、如果染色过深或过浅,应调整染色时间或工作液浓度。
6、pH 值对染色有一定影响,载玻片应清洁、无酸碱污染,以免影响染色效果。
7、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
8、瑞氏染液用前应充分摇匀,保证染色的均一性;染色液用量应充足,勿使染色液蒸发干。
9、瑞氏染液仅用于体外诊断,应由专业人士使用及进行结果的判读。
10、使用前应详细阅读说明书,并做好个人卫生防护,在有效期内使用,生产日期、生产批号和失效日期见包装。
11、用后应按医院或环保部门要求处置废弃物。
[1]张保. (1991). 纠正质量差的瑞氏色素的简便方法. 检验医学, 6(3), 185-185.
[2] 刘志兰, & 赵宝忠. (2009). 瑞氏染液混配机的设计. 生物医学工程与临床, 13(1), 67-70.
[3] 幸建英, 童华波, 汪彦屿, & 吕纯莉. (2009). 瑞氏染色含紫黑色颗粒细胞铁染色57例临床观察. 第三军医大学学报, 31(13), 1324-1325.