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甲磺酸酯属基因毒性杂质，限度为 1.5 g/d。1 每天服药量为 800 mg，据此，MMS和EMS的限度须不大于1.875 g/g。一些甲磺酸酯的临床前研究发现这些甲磺酸酯可直接与生物大分子(DNAs，ＲNAs和蛋白质)发生烷基化反应，可能会导致DNA突变，致癌效应和致畸效应近年来，欧洲药物管理局(EMEA)和美国食品药品监督管理局(FDA)陆续发布了遗传毒性杂质控制的相关法规，提出了采用毒理学关注阈值，具体含义为:一个1．5g/d的TTC值，即相当于每天摄入1．5g的基因毒性杂质，被认为对于大多数药品来说是可以接受的风险(一生中致癌的风险小于十万分之一)，按照这个阀值，可以根据预期的每日摄入量计算出活性药物中可接受的杂质水平因甲磺酸酯类的杂质限度要求较低。
端粒酶(Telomerase)是一种核糖核蛋白逆转录酶,能以自身的RNA为模板,从头合成染色体末端的端粒DNA,弥补细胞分裂时端粒DNA的丢失,维持端粒的长度并稳定染色体。正常人体细胞(非生殖细胞)及酿酒酵母细胞中端粒酶活性的表达很低,用一般的方法几乎检测不到,在90%以上的恶性肿瘤细胞中可检测到端粒酶活性。端粒酶与细胞生长、繁殖、衰老及肿瘤的发生密切相关。酵母是一种较好的模式生物,通过对其基因组的深入研究将有助于人们了解高等真核生物基因组的结构和功能。近来研究发现,酿酒酵母经DNA损伤剂作用后端粒酶活性升高,可能与端粒DNA损伤后修复机制有关。甲磺酸甲酯(MMS)是一种能够损伤DNA的烷化剂,主要使嘌呤碱基上的氮、氧原子发生甲基化,导致DNA双链断裂、点突变。酵母端粒末端序列富含腺嘌呤和鸟嘌呤,是MMS作用的主要靶点。因此,MMS有潜在损伤酵母端粒结构的作用。本研究旨在观察致癌剂MMS对酿酒酵母S288C细胞DNA损伤反应以及对端粒酶活性的影响,为端粒酶与恶性肿瘤的关系提供科学依据。一些酿酒酵母DNA损伤反应基因与人类具有同源性,而且这些基因的突变与人类疾病有关。一直以来人们用酿酒酵母细胞研究DNA损伤反应途径及端粒酶活性关系,作为认识人体内DNA损伤与端粒酶活性和癌变的基础。
本研究将MMS作用于酿酒酵母S288C细胞,观察到染色体DNA有不同程度的损伤,同时端粒酶活性上调。端粒酶活性的上调可能是酵母细胞DNA损伤后修复的需要。已知相关研究结果揭示,延长端粒或使端粒酶过表达将有利于双链DNA的断裂后修复。许多研究已发现,在细胞周期S期细胞对MMS是最敏感的,同时有报道认为端粒酶主要是在S期被激活的,酿酒酵母S288C细胞经MMS作用后,端粒酶活性上调可能与该酶的细胞周期依赖性调节有关。MMS对酿酒酵母S288C细胞端粒酶活性的上调作用可能是通过增加S期细胞的百分率而实现的,并可能介导DNA的损伤修复。总之,在酿酒酵母S288C中,染色体稳定性所依赖的端粒DNA似乎还是通过端粒酶机制来维持的。因此,端粒酶活性的上调可能与MMS引起的DNA损伤后修复有关。
1.溶液配制内标溶液:称取甲磺酸异丙酯约12．5mg，置50mL量瓶中，用二氯甲烷溶解并稀释至刻度，取该溶液1．0mL，置100mL量瓶中，二氯甲烷稀释至刻度(2．5ug/mL)，取该溶液10．0mL，置100mL量瓶中，二氯甲烷稀释至刻度，摇匀，即得。供试品溶液:精密称取样品0．2g，加2mL水溶解后，加2mL内标溶液提取，分离和转移有机层至约含0．2g无水硫酸钠的小瓶中，过滤，取续滤液，即得。对照品溶液:精密称取甲磺酸甲酯甲磺酸乙酯各约12．5mg，分别置50mL量瓶中，用二氯甲烷溶解并稀释至刻度(250g/mL)，取该溶液1．0mL，分别置100mL量瓶中，用二氯甲烷稀释至刻度(2．5g/mL)，分别取上述两溶液1．0mL和浓度为2．5g/mL的内标溶液1．0mL，置同一10mL量瓶中，用二氯甲烷稀释至刻度，摇匀，即得。定位溶液:分别取甲磺酸甲酯甲磺酸乙酯甲磺酸异丙酯浓度均为2．5g/mL的溶液各1mL，分别置10mL量瓶中，用二氯甲烷稀释至刻度，作为定位溶液。
2.色谱条件色谱条件:载气为高纯氦气;柱流量:1．5mL/min;分流比为2∶1;进样量1L;采用程序升温，起始柱温45℃，保持1min，再以10℃/min，升到135℃，维持2min;进样口温度为240℃质谱条件:离子源温度为230℃;接口温度为260℃;溶剂延迟时间:2．5min;检测器电压:调谐电压;电子能量:70eV;扫描(检测)方式:选择性离子检测(SIM)甲磺酸甲酯乙酯异丙酯m/z的为80，79和123
MMS和EMS限度较低(1.875g/g)，因此需要综合限度、灵敏度及溶解度三者间的关系。曾选用乙腈作溶剂，基线噪音较小，灵敏度高，但样品在乙腈中的溶解度达不到检测要求；又分别考察了正己烷和二氯甲烷作为溶剂，两者基线噪音较乙腈略大，检测灵敏度略低。样品在正己烷中虽然溶解度比乙腈高，但仍达不到检测要求。故最终选用二氯甲烷。
[1] 曹卫，郭彦飞，黄志勇．GC-MS法测定甲磺酸萘莫司他中的甲磺酸甲酯与甲磺酸乙酯[J]．山东化工，2018，47（09）：53-54+59．
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