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草酸可降低矿质元素的生物利用率，容易与钙离子形成草酸钙，所以草酸往往被认为是一种矿质元素吸收利用的拮抗物。草酸根有很强的配合作用，草酸能与许多金属形成溶于水的络合物。草酸是有机酸中的强酸，具有很强的还原性、不稳定性、可以跟醇反应生成酯。比如乙二酸跟乙醇反应生成乙二酸二乙酯。草酸对皮肤、粘膜有刺激及腐蚀作用。
分析中用以检定和测定铍、钙、铬、金、锰、锶、钍等金属离子。显微微晶分析检验钠和其他元素。校准高锰酸钾和硫酸铈溶液的标准溶液。建筑行业在涂刷外墙涂料前、由于墙面碱性较强应先涂刷草酸除碱。
催化反应温和，过程比较平稳，持续时间最长。草酸丙酮溶液能催化环氧树脂固化反应，缩短固化时间。也用作合成脲醛树脂、三聚氰胺甲醛树脂的pH值调节剂。还可加入聚乙烯醇缩甲醛水溶性胶黏剂中提高干燥速度和粘接强度。可用作KMnO4氧化剂制备淀粉胶黏剂的促进剂，加快氧化速度，缩短反应时间。
用于提炼稀有金属稀土元素的溶剂、染料还原剂、鞣革剂等。印染工业可代替乙酸，用作色素染料的显色助染剂、漂白剂。草酸还可用于钴-钼-铝催化剂的生产、金属和大理石的清洗及纺织品的漂白、皮革加工、催化剂制备等。
在有机合成工业主要用于生产对苯二酚、季戊四醇、草酸钴、草酸镍、没食子酸等化工产品。塑料工业用于生产聚氯乙烯、氨基塑料、脲醛塑料、漆片等。染料工业用于制造盐基品绿等。此外，草酸还可用于合成各种草酸酯、草酸盐和草酰胺等产品，而以草酸二乙酯及草酸钠、草酸钙等产量最大。
草酸锑可作媒染剂，草酸铁铵是印制蓝图的药剂。
草酸可用来除锈。不过使用时要小心，草酸对不锈钢有较强的腐蚀性。浓度高的草酸也容易腐蚀手，皮肤接触草酸后，应及时用水清洗。
密封于干燥阴凉处保存。严格防潮、防水、防晒。贮存温度应不超过40℃。远离氧化物及碱性物质。用聚丙烯编织袋内衬塑料袋包装。