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尿素别名碳酰二胺、碳酰胺、脲 。是由碳、氮、氧和氢组成的有机化合物,又称脲(与尿同音)。其化学公式为 CON2H4、(NH2)2CO 或 CN2H4O,国际非专利药品名称为 Carbamide。外观是白色晶体或粉末。它是动物蛋白质代谢后的产物,通常用作植物的氮肥。尿素在肝合成,是哺乳类动物排出的体内含氮代谢物。这代谢过程称为尿素循环。尿素是第一种以人工合成无机物质而得到的有机化合物。
一种尿素浓度检测方法,包括:
S1:制备标准溶液,利用购买的尿素溶液或固体尿素配制一定浓度梯度的尿素标准溶液;
S2:配制显色剂,所述显色剂为含有一定浓度二乙酰一肟和硫代氨基脲的溶液;硫代氨基脲的加入,能够使产物颜色稳定、不易褪色,从而保证了测量精度,扩大了线性动态范围,从而解决了现有的尿素浓度检测方法显色时间短、只能在实现室使用的缺陷;
S3:配制酸试剂,利用硫酸和磷酸配制酸试剂,磷酸和硫酸提供给溶液一定的缓冲区间,能够缓冲溶液酸碱度的变化;
S4:测量不同浓度尿素标准溶液的吸光度,制备标准曲线;
S5:将欲测量的尿素溶液与显色剂和酸试剂混合反应,测量产物的吸光度,代入标准曲线中,计算出尿素浓度。
较优的,所述步骤S1中,尿素标准溶液的溶剂为去离子水,浓度介于1-5mg/L。
具体的,例如可通过下述步骤配备标准溶液:
S11:在1L容量瓶中溶解0.1000g尿素于约800mL去离子水,加入0.1mL氯仿,加水定容稀释至刻度,得到100ug/mL的母液;
S12:稀释母液得到各浓度梯度的标液。
本方法中,所配制的标准溶液,既可以用于后期制备标准曲线,也可以用于仪器的自动校准。
较优的,所述显色剂中,溶剂为去离子水,二乙酰一肟的浓度介于10g/L-20g/L,硫代氨基脲的浓度介于0.1g/L-0.2g/L。
具体的,例如可通过下述步骤配备显色剂:
S21:配制二乙酰一肟溶液:称取34.44g二乙酰一肟溶于800mL去离子水中,定容至1000mL,混匀后保存于棕色瓶,避光阴凉保存;
S22:配制硫代氨基脲溶液:称取0.344g硫代氨基脲溶于1000mL去离子水中,混匀后保存于棕色瓶中;
S23:在500mL棕色瓶中,分别加入250mL二乙酰一肟和250mL硫代氨基脲溶液,混匀;有条件的,可以用140kpa高纯氦气脱气1分钟。显色剂一般有效期20d左右。
较优的,所述酸试剂中,溶剂为去离子水,硫酸的浓度介于500g/L-700g/L,磷酸的浓度介于150g/L-250g/L,且酸试剂中含有浓度介于0.03g/L-0.06g/L的氯化铁,氯化铁给溶液提供的三价铁离子能够避免反应产生的羟胺干扰。
具体的,例如可通过下述步骤配备酸试剂:
S31:在1L烧杯中,缓缓加入327mL硫酸于约500mL去离子水中;
S32:再加入128mL的85%磷酸于硫酸-水溶液中;
S33:再加入0.055g氯化铁,用去离子水定容至1000mL。
一种乳中尿素定性检测方法,包括如下所述的步骤。
a.配制浓度为20mg/ml尿素酶溶液,以及使用乙醇配制得到质量含量为0.5%溴百里香酚蓝乙醇溶液。例如在一种示意性实施方式中,称取20mg尿素酶,加入1ml三级水,制成20mg/ml尿素酶溶液;称取0.5g溴百里香酚蓝,加入100ml乙醇,制成质量含量约为0.5%溴百里香酚蓝乙醇溶液。
b.使用奶粉和纯水配制复原乳,其中所述奶粉和所述纯水的质量比为1:7,使用现有的方法准确测量复原乳的尿素含量,以确保所述复原乳中尿素含量在正常范围内。例如在一种示意性实施方式中,称取1g奶粉加入7ml三级水,涡旋混匀,制成复原乳,用酶解法检测其中的尿素含量为0.25g/L。本领域技术人员可以理解,正常的牛乳中也含有尿素,尿素的含量一般在0.21~0.34g/L的范围内(J.S. jonker, R.A. Kohn, R.A. Erdman, Using mile urea nitrogen to predict nitrogen excretion and utilization efficiency in lactating dairy cows, Journal of Dairy Science, 1998,81(10):2682‑2692)。
c.配制尿素溶液,向复原乳中添加制得的尿素溶液,使得复原乳中的尿素浓度增加0.2g/L,得到阳性对照乳。例如在一种示意性实施方式中,称取0.1g尿素,加入10ml三级水,制成10g/L尿素溶液;吸取980uL复原乳,加入20uL的10g/L尿素溶液,混匀,使得复原乳中尿素浓度增加0.2g/L,即得到尿素含量为0.45g/L阳性对照乳。当然也可以配制其他浓度的尿素溶液,只要改变加入尿素溶液的量,保证复原乳中尿素的浓度增加0.2g/L即可。
d.各取1mL待测乳和阳性对照乳,离心处理后分别取上层清液,均加入40uL尿素酶溶液和20uL溴百里香酚蓝乙醇溶液,涡旋混匀后分别得到待测乳清液和阳性对照乳清液。例如在一种示意性实施方式中,各量取1ml待测乳和阳性对照乳,以10000rpm高速离心20min;分别取离心后的上清液,然后均加入40uL尿素酶溶液和20uL溴百里香酚蓝溶液,涡旋5s混匀,得到待测乳清液和阳性对照乳清液。
e.将待测乳清液和阳性对照乳清液静止1min,并按照如下方法定性判断待测乳清液中的尿素含量。
ea.若待测乳清的颜色比阳性对照乳清液的颜色浅,则说明待测乳中的尿素含量小于阳性对照乳中的尿素含量。例如在一种示意性实施方式中,阳性对照乳清液为蓝色,待测乳清为黄绿色,说明待测乳中的尿素含量小于阳性对照乳中0.45g/L的尿素含量。
eb. 若待测乳清的颜色比阳性对照乳清液的颜色深或颜色一致,则说明待测乳中的尿素含量大于或等于阳性对照乳中的尿素含量。
[1][中国发明]CN201610643294.9尿素浓度检测方法及尿素浓度在线监测设备
[2] [中国发明] CN201010597413.4 一种乳中尿素定性检测方法
[3] A+医学百科