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2',7'-二氯荧光素二乙酸酯是一种荧光探针，作为一种非极性化合物，能够迅速扩散到细胞内，细胞内的酯酶将其水解为非荧光的二氯荧光素（DCFH），从而使探针被装载到细胞内。
CN201610307068.3报道了卷烟烟气的体外毒理学研究，具体是一种卷烟烟气有害成分诱导细胞氧化应激ROS的测定方法。卷烟烟气是一种复杂的气溶胶，烟气中的化学成分多达8000余种，同时包含有 1014-1016个自由基，具有氧化性。卷烟烟气中氧化性物质会诱导细胞内活性氧（ROS）的增加，诱导机体产生的ROS会对细胞内蛋白质、脂质和遗传物质（DNA）等造成损伤。测定方法特征在于：是利用荧光探针2',7'-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)检测细胞氧化损伤后胞内活性氧ROS水平，包括以下具体步骤：1)配置实验试剂；2)细胞接种培养；3)、DCFH-DA探针装载；4)、卷烟烟气有害成分染毒；5)、ROS检测。机理是DCFH-DA作为一种非极性化合物，能够迅速扩散到细胞内，细胞 内的酯酶将其水解为非荧光的二氯荧光素（DCFH），从而使探针被装载到细胞内，在ROS存在的条件下，DCFH被氧化生成荧光物质DCF，发出绿色荧光，荧光强度与细胞内活性氧水平成正比。本发明的最大特点是可快速、灵敏地检测卷烟烟气有害成分诱导的细胞氧化损伤程度，对研究卷烟烟气有害成分对于诱导细胞内活性氧ROS的影响有非常重要的意义。
[1] [中国发明] CN201610307068.3 卷烟烟气有害成分诱导细胞氧化应激ROS的测定方法