40077-57-4 / 醋酸阿肽地尔的制备

概述^[1]

醋酸阿肽地尔又称血管活性肠肽，是一种含有28个氨基酸的多肽。其氨基酸机构如下所示：

His‑Ser‑Asp‑Ala‑Val‑Phe‑Thr‑Asp‑Asn‑Tyr‑Thr‑Arg‑Leu‑Arg‑Lys‑Gln‑Met‑Ala‑Val‑Lys‑LysTyr‑Leu‑Asn‑Ser‑Ile‑Leu‑Asn。

醋酸阿肽地尔是从小肠粘膜提取的一种直链肽，其氨基酸排列为一部分胰高血糖素(glucagon)和催胰液素(secretin)，具有可使血管舒张降低血压的作用，从肝动脉开始，对内脏血管具有较强的作用能力。对肠液的分泌具有很强的促进作用，对胃液的分泌可起抑制作用；对消化道平滑肌的收缩产生抑制作用。

应用^[3]

醋酸阿肽地尔为MondobiotechAG和BiogenIdec公司开发出来，是由28个氨基酸组成的线性肽。主要用于急性呼吸窘迫综合症和特发性肺纤维化治疗，其效果较好且副作用小，是一种很有市场前景的多肽药物。

制备^[2]

目前醋酸阿肽地尔常规合成方法为逐个偶联方法，其他合成方法还未有报道，有关其剂型和应用的报道比较常见，如专利CN101247794为醋酸阿肽地尔液体药物制剂及其用于制备治疗肺动脉高压、急性呼吸窘迫综合症等疾病的药物的用途专利；US7468353为在治疗非典型肺部感染中的用途专利。然而，用逐个偶联法在制备醋酸阿肽地尔的过程中，合成周期长，杂质较多，收率和纯度无法达到较高水平，特别是合成His1和Ser2时，逐个偶联法极易产生消旋杂质，并且杂质通过纯化方法难以去除，导致醋酸阿肽地尔产品纯度的降低而杂质D‑His1‑醋酸阿肽地尔以及D‑Ser2‑醋酸阿肽地尔含量过高，影响产品品质。

具体实施方法：

方法一：

步骤1、固相合成在SEQIDNO:1所示氨基酸序列Lys侧链上、Tyr侧链上、Asn侧链上、Ser侧链上偶联有保护基且在C端偶联有树脂的多肽片段树脂Ⅰ；

固相合成在SEQIDNO:2所示氨基酸序列N端、Tyr侧链上、Thr侧链上、Arg侧链上、Lys侧链上、Gln侧链上偶联有保护基且在C端偶联有树脂的多肽片段树脂Ⅱ；

固相合成在SEQIDNO:3所示氨基酸序列N端、Asp侧链上、Thr侧链上、Asn侧链上偶联有保护基且在C端偶联有树脂的多肽片段树脂Ⅲ，然后脱除多肽片段树脂Ⅲ的N端保护基与Boc‑His(3‑Bum)‑Ser(Psi(Me,Me)pro)‑OH偶联得到多肽片段树脂Ⅳ；

步骤2、加入裂解液去除多肽片段树脂Ⅱ和多肽片段树脂Ⅳ的树脂，对应得到多肽片段Ⅱ和多肽片段Ⅳ，然后将多肽片段Ⅱ的C段与多肽片段树脂Ⅰ的N端偶联，接着将多肽片段Ⅳ的C段与脱除N端保护基的多肽片段Ⅱ的N段偶联，得到醋酸阿肽地尔树脂；

步骤3、加入裂解液去除醋酸阿肽地尔树脂中的树脂和所有保护基，获得醋酸阿肽地尔粗品，经RP‑HPLC纯化后获得醋酸阿肽地尔纯品。

其中，作为优选，步骤2所述偶联采用PyBOP/HOBt/DIPEA三试剂偶联体系、HOAt/DIPCDI双试剂偶联体系、HOBt/DIPCDI双试剂偶联体系、HATU/HOAt/DIPEA三试剂偶联体系、TBTU/HOBt/DIPEA三试剂偶联体系、或HBTU/HOBt/DIPEA三试剂偶联体系偶联。步骤2所采用的偶联体系各偶联试剂之间的摩尔比优选为：

PyBOP:HOBt:DIPEA为1:1.2:2，HATU:HOAt:DIPEA为1:1.2:2，HBTU:HOBt:DIPEA为1:1.2:2，TBTU:HOBt:DIPEA为1:1.2:2，HOAt:DIPCDI为1.2:1.2，HOBt:DIPCDI为1.2:1.2；

方法二：

步骤1，通过液相法合成二肽片段Fmoc-Leu-Asn-OH；

步骤2，采用固相合成法，以RinkAmideMBHA氨基树脂为起始树脂，按照醋酸阿肽地尔主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，其中23、24位和27、28位氨基酸偶联采用二肽片段Fmoc-Leu-Asn-OH偶联，而第1位氨基酸采用Boc-His(Trt)-OH；

步骤3，肽树脂裂解，纯化，冻干后得到醋酸阿肽地尔。

其中，步骤1所述的二肽片段Fmoc-Leu-Asn-OH的合成方法包括如下步骤：1）Fmoc-Leu-OH、HOSu和DCC偶联得到Fmoc-Leu-OSu，然后Fmoc-Leu-OSu和H-Asn-OH反应得到二肽片段Fmoc-Leu-Asn-OH。

其中，步骤2所述的固相合成方法，所述方法包括以下步骤：1）采用0.10~0.90mmol/g的氨基树脂为起始树脂；2）采用由体积比为1:4的哌啶和DMF组成的去保护液脱除氨基树脂上的Fmoc保护基；3）在偶联剂系统的存在下，氨基树脂和Fmoc-Leu-Asn-OH偶联得到Fmoc-Leu-Asn-氨基树脂；4）重复步骤2）、3），按照醋酸阿肽地尔主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，其中23、24位氨基酸偶联采用二肽片段Fmoc-Leu-Asn-OH偶联，而第1位氨基酸采用Boc-His(Trt)-OH。所述偶联剂系统包括缩合剂和反应溶剂，所述缩合剂选自DIC/HOBt、PyBOP/HOBt/DIEA或HATU/HOBt/DIEA；所述反应溶剂选自DMF、DCM、NMP、DMSO或他们之间的组合。

主要参考资料

[1]杨东晖, 路杨, & 周亮. . 一种制备阿肽地尔的方法.

[2] 张小灵, 阎朗明, 尹刚, 杨建国, & 徐东. (2004). 肝复肽联合前列地尔治疗慢性重型肝炎20例疗效初步观察. 寄生虫病与感染性疾病, 2(1), 20-20.

[3] 王超. (2011). ATP敏感钾通道的激活对伤害性疼痛行为以及对DRG的超敏反应的拮抗作用. (Doctoral dissertation, 河北医科大学).