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38894-11-0 / 酚试剂的应用

背景及概述[1]

酚试剂是一种常用的测定蛋白质试剂,与蛋白质的呈色反应包括二步:第一步是在碱性条件下,蛋白质与铜作用生成蛋白质-铜复合物;第二步是蛋白质-铜复合物还原磷钼酸-磷钨酸试剂,生成蓝色物质。在一定条件下,蓝色强度与蛋白质的量成正比。此法是生化工作领域内较广泛应用的一种蛋白质浓度测定的方法。优点是操作简便,灵敏度高,可测25~250μg蛋白质;缺点是该试剂只与蛋白质中酪氨酸、色氨酸起反应,因此有蛋白质特异性影响,即不同蛋白质因酪氨酸、色氨酸含量不同而使显色强度稍有不同,标准曲线也不是严格直线。

应用[2-3]

应用一:

现有的对空气中甲醛含量的测定方法,多利用一些列酶与甲醛发生的酶促反应,再将反应物置于紫外/可见光分析仪下,检测主波长处吸光度上升的程度,从而测算出甲醛的浓度大小。这些方法中所选酶系复杂,具有一定的检测成本,且计算过程相对保密,限制了使用范围。并且其精确度较低,属于定性测量,限制测定的场所。针对现有技术中的不足,利用酚试剂比色法来测定空气中甲醛含量,灵敏度高,选择性好,操作简便。

技术方案为:一种空气中甲醛含量测定方法,利用不同浓度的甲醛与酚试剂反应生成嗪,采用酚试剂比色法绘制标准曲线,然后在硫酸铁铵的高铁离子存在下,嗪在酸性溶液中被高铁离子氧化形成蓝绿色化合物,根据颜色深浅,比色测定得出空气中甲醛含量,具体包括以下步骤:

(1)采样:采样前,被采样房间必须密闭24小时,采样需在风平浪静气候环境下进行,用一个内装5毫升吸收液的大型气泡吸收管,以0.5升/分流量,采气10升;

(2)标准曲线的绘制:取8支10毫升的比色管,按照下表配制标准色列:

酚试剂的应用

在各管中加入0.40毫升1%硫酸铁铵溶液,摇匀,放置15分钟后,用1厘米的比色皿,于波长630纳米处,以水为参比,测定吸光度,以吸光度对甲醛含量(微克),绘制标准曲 线,或用最小二乘法计算标准曲线的回归方程式:

Y=bX+a——(a)

(a)式中:

Y—(A-A0),即标准溶液吸光度(A)与试剂空白液吸光度(A0)之差;

X—甲醛含量,微克;

b—回归方程式的斜率;

a—回归方程式的截距,

(3)样品测定:采样后,将样品溶液移入比色管中,用少量吸收液洗涤吸收管,洗液 并入比色管使总体积为5毫升;

(4)、数据处理,按照下式计算甲醛溶液的浓度C,单位:毫克/毫升,

(b)式中:

A—样品溶液吸光度;

A0—试剂空白液吸光度;

b—回归方程式的斜率;

a—回归方程式的截距;

Vr—换算为参比状态下的采样体积,单位为升。

应用二:

目前,检测蛋白质常用的方法有凯氏定氮法、自动定氮仪法、双缩脉法,通过同时 对饲料中的粗蛋白质进行测定,并对结果进行了分析比较,结果表明:凯氏定氮法测定所用的时间较长,测得结果比较稳定;自动定氮仪同国标法相比,结果偏高,相对偏差较小,但实 验成本高;双缩脉法测定结果偏低,偏差较大,但操作简单,效率高,更适合饲料厂等企业的快速测定。因此,这些缺点使得以上方法均无法满足企业实际生产的需要。酚试剂可用于提供一种牧草饲料中蛋白质的检测方法,以解决上述背景技术中提出的问题。

检测步骤如下:

(1)称取牧草饲料粉碎,放入烧瓶中,加入氢氧化钠溶液,放入60℃的水浴中5h进行反 应,取出摇匀,加入蒸馏水稀释40倍,离心5min,静置;

(2)取上清液放入试管中,加入酚试剂甲液,混合均匀,于38℃恒温水浴中放置20min;再加入酚试剂乙液,立即振荡混合均匀,在38℃恒温水浴中保温30min,用1cm光径比色皿在750nm波长下测定吸光度,并根据测定结果与标准曲线对比得到样品蛋白质含量。

标准曲线的建立如下:

(1)试剂配制

标准蛋白溶液0.10mg/mL;

酚试剂甲液:将3%碳酸钠溶液、0.2mol/L氢氧化钠溶液、0.01%五水硫酸铜溶液、0.02%柠檬酸钾溶液等体积混合,该溶液当天配制当天使用;

酚试剂乙液:配制浓度为2.5%的钼酸钠溶液,与体积分数为85%的浓磷酸进行反应,加入硫酸锂和溴化氢,稀释5倍,过滤后,保存在棕色瓶中;使用时前进行标定;

(2)曲线制作

取8支试管,加入不同量的标准蛋白和蒸馏水混匀后,每管加入4mL酚试剂甲液,混匀,于38℃下放置20min;再加入0.4mL酚试剂乙液,立即振荡混匀,在38℃下保温30min,用1cm光径比色皿在750nm下测定吸光度;以蛋白质浓度为横坐标,以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

主要参考资料

[1]常用中药词语词典

[2]CN201710579528.2

[3] CN201610949713.1