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苯甲基磺酰氟（PMSF）是一种不可逆的丝氨酸蛋白酶抑制剂，如胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、凝血酶等，、作用原理是特异性识别并磺化决定酶活性的丝氨酸残基活性位点。此外，其对半胱氨酸蛋白酶（如木瓜蛋白酶，DTT逆转其抑制活性）和哺乳动物来源的乙酰胆碱酯酶也有抑制效果。PMSF常在细胞或组织裂解之前加入到裂解液中以预防蛋白的降解。PMSF可以单独使用，也常与其他蛋白酶抑制剂如胃抑肽酶A或者磷酸酶抑制剂如正钒酸钠混合使用。
本品以粉末形式提供，难溶于水，且在水溶液中的稳定性很差，必须在使用前才加入裂解液或其他水溶液中。PMSF粉末可用甲醇，乙醇或者异丙醇溶解配置储存液（如200 mM），有效工作浓度为0.1-1 mM。
另有PMSF的无毒替代物，AEBSF，为不可逆的丝氨酸蛋白酶抑制剂，活性和功能同PMSF，且易溶于水。
一种苯甲基磺酰氟的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将锌粉、活化剂与溶剂四氢呋喃进行回流反应，搅拌条件下滴加氯化苄的四氢呋喃溶液，继续保温反应，过滤，得到苄基氯化锌；(2)配制磺酰氟四氢呋喃溶液，加热，搅拌条件下滴加步骤(1)制备的苄基氯化锌的四氢呋喃溶液，保温反应，然后升温反应，反应毕，经过后处理，得到苯甲基磺酰氟。