手机扫码访问本站
微信咨询
用于测定酸性磷酸酶的最常用试剂是二磷酸酚酞或其四钠盐，百里酚酞单磷酸二钠和萘胺单磷酸二钠，这些物质都是用于确定pH值的经典磷酸盐衍生物，通常以钠盐的形式使用。在这些试剂中，二磷酸酚酞或其四钠盐更为有效，易于观察，与其他试剂相比，该试剂的成本低，在介质中释放的酚酞的毒性低。
在50g的烧杯中，称重8.0g的酚酞，转移至浸入碎冰浴和粗盐中的三管状气球中。然后加入12.5ml二氯甲烷和6.3ml三氯氧化磷，强烈搅拌，获得均匀悬浮液；将含有6.3ml三乙胺的恒压加料漏斗与三管烧瓶相连，使反应温度不超过4°C，在最高4°C的搅拌下保持6小时，添加少量的10％NaOH溶液来评估反应进程，该测试显示为粉红色，就可以将反应保持在室温下，如果观察到阴性结果，即相对于10％NaOH溶液为无色，则应重复该测试。
之后蒸发除去二氯甲烷，然后在约4°C下不断搅拌下加入100ml冷蒸馏水，释放所有HCl蒸气后，观察到形成类似于琥珀色的淡黄色沉淀物质，在搅拌下添加40％NaOH溶液，直到所有沉淀物重新溶解为止。用pH1.00的无机酸酸化邻苯二甲酸二磷酸酯的水溶液，使苯甲酸邻苯二甲酸二磷酸酯沉淀，然后从上清液中分离出该物质，并在250mL烧杯中，将酸性双磷酸苯酞的全部物质溶于最少量的新鲜蒸馏的VetecPA级甲醇中，加入几滴VetecPA级甲酰胺以增加溶解度，在搅拌下加入1.0mol.L-1乙醇钠溶液，直到所有沉淀完成，通过过滤分离苯基酞菁双磷酸四钠的沉淀，然后用无水乙醚反复洗涤邻苯二甲酸酯双磷酸四钠，重复该步骤直到固体几乎干燥。将邻苯二甲酸二苯酯双磷酸四钠溶解在最少量的甲醇/甲酰胺（5：1）中，然后缓慢加入乙醇，使纯化的二磷酸酚酞重新沉淀，过滤分离后，将二磷酸酚酞四钠保持在真空干燥器中。
[1] WO2015035487 METHOD AND KIT FOR SYNTHESIZING PHENOLPHTHALEIN DIPHOSPHATE TETRASODIUM