2068-78-2 / 硫酸长春新碱的合成和脂质体制备

背景及概述^[1-2]

硫酸长春新碱(vincristinesulfate，VCR)是夹竹桃科植物长春花生物碱类的细胞周期特异性抗肿瘤药物，抗肿瘤作用靶点是微管，主要抑制微管蛋白的聚合而影响纺锤体微管的形成，使有丝分裂停止于中期。和其它长春花生物碱类一样，VCR对于许多淋巴组织的恶性肿瘤，包括侵袭性非霍奇金淋巴瘤和急性淋巴细胞白血病，有着很好的治疗效果。临床主要应用于急性白血病、恶性淋巴瘤、神经母细胞瘤、慢性淋巴细胞白血病等疾病的治疗。

制备^[1]

2g的硫酸长春碱溶于240ml四氢呋喃，加入7.5ml冰醋酸，在其保护下，用干冰降温至-65℃，搅拌下，滴加配制好的重镉酸钠溶液(3g重镉酸钠溶于15ml水，再加入2ml浓硫酸，搅拌溶解)，滴加过程中维持反应温度在-50℃以下。滴加完毕，在-65℃下搅拌反应3小时。

将反应液倒入35ml浓氨水和200ml水的混合溶液中，用600ml二氯甲烷萃取，无水硫酸镁干燥，减压浓缩，得到长春新碱粗品2.06g，HPLC检测纯度83％。

得到的长春新碱粗品用异丙醇20ml溶解，搅拌下，滴加1％硫酸异丙醇溶液16ml调节PH≤4时滤出固体，真空干燥，得到硫酸长春新碱粗品1.82g，HPLC检测纯度92％。

将硫酸长春新碱粗品1.8g溶于36ml无水乙醇中，冷却至-10℃，缓慢搅拌，析出固体，过滤，无水乙醇洗涤，真空干燥，得到硫酸长春新碱1.63g，收率81.5％，HPLC检测纯度98.6％。

脂质体制备^[2]

硫酸长春新碱脂质体VCR-Lipo的制备如下：

S1、PEG长循环脂质体(Lipo)的制备：

将溶解在氯仿中的鸡蛋鞘磷脂(sphingomyelin，SM)、胆固醇(Cholesterol)、和DSPE-PEG2000按摩尔比55：40：5加入园底烧瓶中，在60℃下用旋转蒸发仪，以转速为200rpm/min旋转并打开真空泵抽真空10min形成干燥薄膜，真空干燥仪过夜干燥以去除残留的有机溶剂。

其中SM为Avantipolarlipids公司产品，货号为860061P；胆固醇为Avantipolarlipids公司产品，货号为700100P；DSPE-PEG2000为Avantipolarlipids公司产品，货号为880128P。

将瓶底的脂质薄膜用lml300mM的枸橼酸缓冲液(pH＝4.0)进行水化，50℃水浴超声20min后，在液氮、60℃水浴反复冻融5次。将产物装入脂质体挤推器，依次通过200nm、100nm的聚碳酸酯膜各20次，最后过50nm的聚碳酸酯膜21次，形成直径在100nm左右的PEG修饰的空白脂质体(Lipo)。

S2、包裹药物脂质体(VCR-Lipo)的制备

按照硫酸长春新碱：空白脂质体质量比1:10，取0.5mg长春新碱溶液(1mg/ml)和5mg空白脂质体，加入1mlNa2HPO4溶液(500mmol/L，pH9.0)调节外水相pH为7.0，放置60℃水浴10分钟，即制备包裹硫酸长春新碱的纳米脂质体VCR-Lipo。其中，硫酸长春新碱为浙江海正药业股份有限公司产品，批号为130501。

参考文献

[1][中国发明,中国发明授权]CN200810216286.1高纯度硫酸长春新碱的制备方法

[2][中国发明,中国发明授权]CN201510988547.1硫酸长春新碱脂质体及制备方法和应用