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189950-66-1 / Ac-DEVD-pNA的制备

概述[1]

Caspase全称为含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase)。caspase是一组存在于细胞质中具有类似结构的蛋白酶。Caspase与真核细胞凋亡密切相关,并参与细胞的生长、分化与凋亡调节。Caspase是一类蛋白酶家族,成员较多,在人类,已经鉴定了11种不同的caspase,根据其蛋白酶序列的同源性可分为3个亚族:Caspase-1亚族包括 Caspase-1、4、5、11;Caspase-2亚族包括Caspase-2、9; Caspase-3亚族包括Caspase-3、6、7、8、10。作为caspase-3/7的首选肽类底物,Ac-DEVD-pNA和Ac-DEVD-AMC被广泛应用于细胞生物学、化学生物学和药用化学领域中。目前,Ac-DEVD-pNA主要用于检测细胞中caspase-3和caspase-7的活性,也用于鉴定和评估caspase-3和caspase-7抑制剂和procaspase-3/7的小分子激活剂。其具体作用机理是:Caspase-3或caspase-7催化Ac-DEVD-pNA的水解,继而释放出发色基团对硝基苯胺,通过对对硝基苯胺发色强度的检测,相应检测出体内caspase-3或caspase-7的活性大小。

制备[1]

Ac-DEVD-pNA制备如下:

1)合成Ac-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Val-Asp(OtBu)-pNA

取Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Val-Asp(OtBu)-pNA(1.44g,1.8mmol),DCM40ml加入到圆底烧瓶中,搅拌反应,乙酸、三乙胺再缓缓滴加到到反应液中,反应液立即变为琼脂状,用玻璃棒搅拌,再加入二氯甲院,避光反应,完全反应。真空浓缩再用乙醚碾磨,真空过滤,干燥得到白色固体粉末1.32g,产率91%。

反应方程式:

Ac-DEVD-pNA的制备

2)合成目标产物Ac-DEVD-pNA

取1.32gAc-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Val-Asp(OtBu)-pNA加入到三氟乙酸/二氯甲烷溶液中,反应液慢慢澄清,室温下避光撹拌反应,真空浓缩,残留液用乙醚碾磨三次,然后真空过滤,干燥得到白色稍带浅棕色粉末固体0.96g,产率为91.4%。反应方程式:

Ac-DEVD-pNA的制备

主要参考资料

[1] Caspase-3/7底物的合成及其相关荧光分子合成新方法的研究