148031-34-9/酸埃依非巴肽的应用和制备

急性冠脉综合征（ＡＣＳ）严重危害人类健康，应用抗血小板药物是治疗的关键步骤之一。血小板糖蛋白Ⅱｂ／Ⅲａ受体是血小板血栓形成的最终共同路径，阻断这一受体即可有效地抑制各种诱导剂激发的血小板聚集，其拮抗剂成为一类新的、强效的、更合理的治疗缺血性心脏病的药物。大量循证医学研究证实，血小板糖蛋白ＧＰⅡｂ／Ⅲａ受体拮抗剂能显著改善ＡＣＳ和经皮冠状动脉介入术（ＰＣＩ）患者的临床预后，明显降低ＡＣＳ患者的死亡率和心血管不良事件的发生率。血小板糖蛋白Ⅱｂ／Ⅲａ受体拮抗剂类药物已开发很多，目前国际上可用于临床的有３种制剂，阿昔单抗、依替巴肽和替罗非班。国内关于血小板糖蛋白ＧＰⅡｂ／Ⅲａ受体拮抗剂的使用经验甚少，可供使用的药物也非常有限，仅有１种药物即盐酸替罗非班上市，因而开发新的血小板糖蛋白Ⅱｂ／Ⅲａ受体拮抗剂势在必行。国产酸埃依非巴肽是成都圣诺生物制品有限公司生产的一个血小板糖蛋白Ⅱｂ／Ⅲａ受体拮抗剂，本文研究国产酸埃依非巴肽体内、体外对犬血小板聚集的抑制作用及作用特点，为其临床应用提供实验依据。

酸埃依非巴肽制备如下：

1）Boc-Pro-Cys(acm)-NH2的合成

在50毫升的圆底烧瓶中加入Boc-Pro-OH(1.076g)，NH2-Cys(acm)-NH2(0.960g)，HOSU(N-羟基琥珀酰亚胺)(0.575g)，用无水DMF40毫升溶解，在冰水浴下加入DCC(1.030g)后，在室温下搅拌2小时，检测反应完全。抽滤除去反应产生的沉淀，减压浓缩除去DMF，之后用大量乙酸乙酯溶解，依次用10％NaHCO3、15％稀盐酸、饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，旋干乙酸乙酯，得到固体1.760g。HPLC纯度：大于92％，收率为90.5％MS＝389(M+1)。

2）Boc-Trp-Pro-Cys(acm)-NH2的合成

称取Boc-Pro-Cys(acm)-NH2(1.945g)置于50毫升的圆底烧瓶中加入6mol/L的HCl/THF溶液20毫升，在室温下反应30分钟，检测反应完全，减压浓缩除去HCl/THF溶液，残留物中加入乙酸乙酯溶解，再减压浓缩除去乙酸乙酯，如此重复数次，直到除尽HCl。在50毫升的圆底烧瓶中加入Boc-Trp-OH(1.515g)，NH2-Pro-Cys(acm)-NH2(1.445g)，HOSU(0.575g)，用无水DMF40毫升溶解，在冰水浴下加入DCC(1.030g)后，在室温下搅拌2小时，检测反应完全。抽滤除去反应产生的沉淀，减压浓缩除去DMF，之后用大量乙酸乙酯溶解，依次用NaHCO3、稀盐酸、饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，旋干乙酸乙酯，得到固体2.507g。HPLC纯度：大于93％，收率为87％MS＝576(M+1)。

3）Boc-Asp(OBzl)-Trp-Pro-Cys(acm)-NH2的合成

称取Boc-Trp-Pro-Cys(acm)-NH2(2.880g)置于50毫升的圆底烧瓶中加入6mol/L的HCl/THF溶液20毫升，在室温下反应30分钟，检测反应完全，减压浓缩除去HCl/THF溶液，残留物中加入乙酸乙酯溶解，再减压浓缩除去乙酸乙酯，如此重复数次，直到除尽HCl。在50毫升的圆底烧瓶中加入Boc-Asp(OBzl)-OH(1.615g)，NH2-Trp-Pro-Cys(acm)-NH2(2.380g)，HOSU(0.575g)，用无水DMF40毫升溶解，在冰水浴下加入DCC(1.030g)后，在室温下搅拌2小时，检测反应完全。抽滤除去反应产生的沉淀，减压浓缩除去DMF，之后用大量乙酸乙酯溶解，依次用NaHCO3、稀盐酸、饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，旋干乙酸乙酯，得到固体3.315g。HPLC纯度：大于93％，收率为83％MS＝782(M+1)。

4）Boc-Har-Gly-Ome的合成

在50毫升的圆底烧瓶中加入Boc-Har-OH(1.440g)，NH2-Gly-Ome(0.445g)，HOSU(0.575g)，用无水DMF40毫升溶解，在冰水浴下加入DCC(1.030g)后，在室温下搅拌2小时，检测反应完全。抽滤除去反应产生的沉淀，减压浓缩除去DMF，之后用大量乙酸乙酯溶解，依次用NaHCO3、稀盐酸、饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，旋干乙酸乙酯，得到固体1.687g。HPLC纯度：大于95％，收率为94％MS＝359(M+)

5）Mpr(acm)-Har-Gly-Ome的合成

称取Boc-Har-Gly-Ome(1.795g)置于50毫升的圆底烧瓶中加入6mol/L的HCl/THF溶液20毫升，在室温下反应30分钟，检测反应完全，减压浓缩除去HCl/THF溶液，残留物中加入乙酸乙酯溶解，再减压浓缩除去乙酸乙酯，如此重复数次，直到除尽HCl。在50毫升的圆底烧瓶中加入Mpr(acm)-OH(0.585g)，NH2-Har-Gly-Ome(1.295g)，HOSU(0.575g)，用无水DMF40毫升溶解，在冰水浴下加入DCC(1.030g)后，在室温下搅拌2小时，检测反应完全。抽滤除去反应产生的沉淀，减压浓缩除去DMF，之后用大量乙酸乙酯溶解，依次用NaHC03、稀盐酸、饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，旋干乙酸乙酯，得到固体1.490g。HPLC纯度：大于92％，收率为83％MS＝359(M+)

6）Mpr(acm)-Har-Gly-OH的合成

称取Mpr(acm)-Har-Gly-Ome(1.795g)置于50毫升的圆底烧瓶中加入2mol/L的NaOH/THF溶液20毫升，在室温下反应30分钟，检测反应完全，用稀盐酸调节pH＝6，出现大量白色沉淀，过滤，用无水乙醚固化，得到白色粉末Mpr(acm)-Har-Gly-OH，质量为1.466g。HPLC纯度：大于91，收率为85MS＝345(M+)

7）Mpr(acm)-Har-Gly-Asp(OBzl)-Trp-Pro-Cys(acm)-NH2的合成

称取Boc-Asp(OBzl)-Trp-Pro-Cys(acm)-NH2(3.995g)置于50毫升的圆底烧瓶中加入6mol/L的HCl/THF溶液20毫升，在室温下反应30分钟，检测反应完全，减压浓缩除去HCl/THF溶液，残留物中加入乙酸乙酯溶解，再减压浓缩除去乙酸乙酯，如此重复数次，直到除尽HCl。在50毫升的圆底烧瓶中加入Mpr(acm)-Har-Gly-OH(1.725g)，NH2-Asp(OBzl)-Trp-Pro-Cys(acm)-NH2(3.495g)，HOSU(0.575g)，用无水DMF40毫升溶解，在冰水浴下加入DCC(1.030g)后，在室温下搅拌12小时，检测反应完全。抽滤除去反应产生的沉淀，减压浓缩除去DMF，之后用大量乙酸乙酯溶解，依次用NaHCO3、稀盐酸、饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，旋干乙酸乙酯，得到固体3.902g。HPLC纯度：大于87％，收率为76％MS＝1010(M+1)

当Mpr(X)-Har(R4)-Gly-Asp(R2)-Trp(R3)-Pro-Cys(Y)-NH2侧链保护基，与实施例中一致时，既可以采用步骤a来脱除，也可以采用步骤b来脱除。当侧链保护基都能用强酸脱除时，则直接采用步骤2脱除。实施例Mpr(acm)-Har-Gly-Asp(OBzl)-Trp-Pro-Cys(acm)-NH2合成之后，去侧链保护基，采用步骤1：

a、称取Mpr(acm)-Har-Gly-Asp(OBzl)-Trp-Pro-Cys(acm)-NH2(5.135g)置于50毫升的圆底烧瓶中加入20毫升甲醇，加入10％Pd/C(0.1g)，通入氢气致0.03MP，然后在15℃-30℃之间氢化还原24小时，检测反应完全。滤除10％Pd/C，减压浓缩除去甲醇，得到油状物，用无水乙醚固化，得到白色固体产品Mpr(acm)-Har-Gly-Asp-Trp-Pro-Cys(acm)-NH24.416g。HPLC纯度：大于96％，收率为96％MS＝920(M+1)

b、将带侧链保护的Mpr(acm)-Har-Gly-Asp(OBzl)-Trp-Pro-Cys(acm)-NH2线性肽(4.600g)溶解于二甲硫醚3毫升、苯甲醚3毫升、三氟甲磺酸和三氟乙酸(体积比4∶1)12毫升的混合溶液中，在室温下反应1小时，加入冰乙醚，得到白色固体3.502g(Mpr(acm)-Har-Gly-Asp-Trp-Pro-Cys(acm)-NH2)。HPLC纯度：大于90％，收率为84％MS＝920(M+1)

当Mpr(X)-Har-G1y-Asp-Trp-Pro-Cys(Y)-NH2中的X和Y都为氢的时候可以采用步骤A或者步骤B；当X和Y为实施例中的基团时，则采用步骤A：

A、将Mpr(Acm)-Har-Gly-Asp-Trp-Pto-Cys(Acm)-NH2(4.595g)线性肽溶于1.5mmol/ml(I2/MeOH)溶液70毫升中，在室温下反应10～50分钟，检测反应完全。得到目标产品质量为3.108g。HPLC纯度：大于91％，收率为80％MS＝772(M+)。

B、将Mpr-Har-Gly-Asp-Trp-Pro-Cys-NH2(3.860g)线性肽溶于70毫升水中，将PH调至6～9之间，加入双氧水2.5毫升，在室温下反应10-50分钟，检测反应完全。得到目标产品酸埃依非巴肽质量为3.282g。

本品又称依非巴特、埃替巴肽，为血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体可逆性拮抗剂，不良反应轻，出现可立即停药。选择性高作用强。无抗原性，不引起过敏反应。适用于急性冠状动脉综合征、冠状动脉内介入治疗前和急性Q波性心肌梗死。可缓解不稳定型心绞痛症状，减少心血管事件发生率。可限制非Q波性心肌梗死范围，减少穿壁型心肌梗死的发生。

用于治疗急性冠状动脉综合征，起始量180μg/kg静脉注射，维持量以每分钟2μg/kg持续静脉滴注72h，如施行急诊经皮冠状动脉介入术，术后持续静脉滴注18～24h。用于经皮冠状动脉介入术，起始量180μg/kg静脉注射，后每分钟2μg/kg持续静脉滴注，10min后再次用180μg/kg静脉注射，其后以每分钟2μg/kg持续静脉滴注18～24h。

针剂20mg/支(10mL)，75mg/瓶(100mL)，200mg/瓶(100mL)。

[1] 国产依替巴肽抗犬血小板聚集作用研究

[2] CN200910156804.X一种依替非巴肽的合成制备工艺

[3] 常用新药精汇手册