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136112-00-0/苯酚 – 氯仿 – 异戊醇混合物的应用

概述[1]

苯酚 - 氯仿 - 异戊醇混合物又叫酚-氯仿-异戊醇混合物,是指由上述三种试剂组成的混合物。

应用[1]

高效提取土壤微生物DNA的方法,包括如下步骤:

(1)称取0.3-0.4g样品加入Lysing Matrix E Tube中。加入978μl的SPB,加入122μ l的MT Buffer;

(2)盖紧Lysing Matrix E Tube的盖子,将离心管置于涡旋混合仪上,对管内物质进行震荡破碎均质化,时间设定为40-50s。在8000r/min转速下离心15min。

(3)将上清液用大枪头吸出转入2ml的微离心管中,加入等体积的酚-氯仿-异戊醇 (25:24:1),颠倒混匀,15℃,10000rpm,离心10min;

(4)转移上清至干净的离心管中,加入等体积的氯仿-异戊醇(24:1),颠倒混匀,15 ℃,10000rpm,离心10min,取上清;

(5)加入250μl的PPS,颠倒混匀10次以上,室温静置10min;

(6)在8000r/min转离心5min,用大口枪头将上清液转移至2ml离心管;

(7)吸取800μl的摇匀Binding Matrix加入上一步中的离心管;

(8)将离心管上下颠倒2min后静置3min,等待二氧化硅基质沉淀;

(9)移除500μl上清液,避免吸出沉淀物;

(10)将剩余的上清液与沉淀物重新混匀,吸取约600μl混合液移入SPIN Filter 中,8000r/min转下离心1min;

(11)倒掉收集管中的液体,重复上一步操作直至2ml离心管中的液体吸尽;

(12)加入已制备好的SEWS-M溶液500μl,用小枪头小心混匀后,8000r/min转下离 心1min,弃去收集管中的液体;

(13)重复上一步后,将收集管更换为1.5ml的Catch Tube;

(14)在室温下,将SPIN Filter风干5-10min;

(15)往SPIN Filter中加入80μl的DES溶液,用小枪头使之与Binding Matrix混 匀,65℃水浴15min。8000r/min转下离心2min,可得到约50μl的DNA溶液,再加入80μl的DES 溶液重复这一步操作,即可获得约100μl的土壤微生物DNA溶液。

主要参考资料

[1] [中国发明] CN201711361715.X 一种高效提取土壤微生物DNA的方法