133-06-2 / 克菌丹的制备及含量测定

背景及概述

克菌丹化学名：N-(三氯甲硫基)-环己-4-烯-1,2-二甲酰亚胺，化学式为C₉H₈O₂NSCl₃，为白色晶体，是一种常用的农业杀菌剂，可用于防治Botrytis、Fusarium、Fusicoccum、Pythium。可增强反硝化作用和总培养菌。克菌丹属于三氯甲硫基类杀菌剂，是苯二甲酰亚胺的衍生物。克菌丹主要用作杀菌剂，它们对多种果树、蔬菜病害的灭杀效果好，且药害小，适当使用还有刺激植物生长的作用。尽管克菌丹对哺乳动物毒性低，但反刍动物尤其绵羊对它特别敏感，致死量极低，同时克菌丹是对人具有可疑致癌的农药。

制备

由丁二烯与顺丁烯二酸酐反应生成1,2,3,4-四氢苯二甲酸酐，再与氨作用合成1,2,3,4-四氢苯二甲酰亚胺，最后与三氯硫氯甲烷反应得克菌丹，即N-(三氯甲硫基)-环己-4-烯-1,2-二甲酰亚胺。

1,2,3,4-四氢化邻苯二甲酰亚胺的制备

1,2,3,4-四氢化邻苯二甲酸酐的制备将顺丁烯二酸酐和苯混合加热，使酸酐溶解，待温度升至70℃时，通入丁二烯，在(75±2)℃反应，直至通气反应至终点，然后趁热把物料放入结晶槽，冷却至室温，过滤，滤饼于50～70℃干燥，得1,2,3,4-四氢化邻苯二甲酸酐，含量95%以上。 2.1,2,3,4-四氢化邻苯二甲酰亚胺的制备将氨水加入反应瓶中，于50℃以下加入1,2,3,4-四氢化邻苯二甲酸酐,逐渐升温至105～110℃，使剩余的游离氨及水蒸发，再逐渐升温至230～250℃，约4.5～5h，将物料放出，冷却至80℃，加热水溶解，冷却结晶，过滤，干燥，得1,2,3,4-四氢化邻苯二甲酰亚胺[1]。

N-(三氯甲硫基)-环己-4-烯-1,2-二甲酰亚胺的制备

将1,2,3,4-四氢化邻苯二甲酰亚胺加入到预冷至0℃的5%～6%的氢氧化钠溶液中，待完全溶解后，加入三氯硫氯甲烷，在0～5℃反应。当pH值为8以下时，视反应结束，过滤，滤饼用水洗至中性，干燥，得N-(三氯甲硫基)-环己-4-烯-1,2-二甲酰亚胺。

固相萃取气相色谱法测定克菌丹含量

采用硅镁吸附剂和硅胶作为混合固相萃取的净化方法，建立了固相萃取气相色谱法同时测定水果中克菌丹的分析方法。研究了多种固相萃取柱和不同洗脱溶剂对克菌丹保留行为的影响，优化了固相萃取净化方法及样品提取方法的分析条件。用ＧＣ-ＥＣＤ检测，克菌丹在0.05～2.0ｍｇ／Ｌ浓度范围内呈线性关系，相关系数大于0.997。苹果中4个浓度克菌丹的加标回收率分别在100％～111％之间，ＲＳＤ在3.0％～7.2％和2.8％～4.2％之间。克菌丹的方法检出限分别为0.012ｍｇ/ｋｇ。

仪器与试剂

ＴＲＡＣＥＧＣ2000气相色谱仪（美国菲尼根公司），带有电子捕获检测器（ＥＣＤ）和电子流量控制‚ＡＳ2000自动进样器；ＶａｒｉａｎＣＰ-Ｓｉｌ8ＣＢ（30ｍ×0.32ｍｍ×0.25μｍ）色谱柱（相当于ＤＢ-5）；载气为氮气（纯度99.999％）。ＵＬＴＲＡＴＵＲＲＡＸＴ18ｂａｓｉｃ分散机（广州仪科实验室技术有限公司）。

正己烷、丙酮、二氯甲烷、环己烷、乙酸乙酯均为分析纯‚使用前用全玻璃蒸馏器重蒸。乙腈为色谱纯。Ｖ（丙酮）∶Ｖ（正己烷）＝1∶9混合溶液。Ｖ（正己烷）∶Ｖ（二氯甲烷）∶Ｖ（乙腈）＝50∶49∶1混合液。无水硫酸钠（分析纯）：使用前在500℃马弗炉中灼烧4ｈ。ＮａＣｌ（分析纯）：140℃烘4ｈ。硅镁吸附剂：（75～150μｍ，中国医药集团上海化学试剂公司），在650℃马弗炉中灼烧3ｈ，再在130℃烘箱中烘干3ｈ，然后加入占总重量10％的水去活，平衡24ｈ后使用。硅胶（75～150μｍ，青岛胜海化工有限公司），130℃烘3ｈ，加入占总重量10％的水去活，平衡24ｈ后使用。

样品处理

准确称取25ｇ加工好的匀浆样品放入100ｍＬ烧杯中，加水15ｍＬ磷酸，乙腈50ｍＬ，在分散机中匀浆2ｍｉｎ后过滤，滤液全部过滤到装有5～7ｇＮａＣｌ的100ｍＬ具塞量筒中，收集滤液60～70ｍＬ，盖上塞子，剧烈振荡1ｍｉｎ，在室温下静置20ｍｉｎ，待乙腈相和水相分层。分层后，准确吸取10ｍＬ乙腈提取液，置入50ｍＬ烧杯中，将烧杯放在70℃的水浴上加热，蒸发近干。在烧杯中加入2．0ｍＬ正己烷溶解样品，然后将溶液转移到净化柱中净化‚用5．0ｍＬＶ（正己烷）∶Ｖ（二氯甲烷）∶Ｖ（乙腈）＝50∶49∶1混合溶液洗烧杯，并加到柱中洗脱，再重复二次，收集所有淋洗液。将淋洗液在旋转蒸发仪上浓缩至5ｍＬ左右，浓缩温度72℃，然后用氮气流吹干，用环己烷定容至2．0ｍＬ（或5．0ｍＬ），供气相色谱分析。

层析柱的制备

在10ｍＬ玻璃注射器内放入少许脱脂棉，从下到上依次分别加入0．75ｇ硅镁吸附剂、0．75ｇ硅胶和约0．5ｇ无水硫酸钠，敲实，加5．0ｍＬＶ（丙酮）∶Ｖ（正己烷）＝1∶9混合溶液于玻璃注射器中，润湿吸附柱，用于样品净化。

标准样品的配制

克菌丹：准确称取0．0502ｇ克菌丹标准物质于100ｍＬ烧杯中，用甲醇溶解，溶解后转移到100ｍＬ容量瓶中并稀释至刻度，浓度为502ｍｇ／Ｌ；

色谱条件

色谱条件如下图：

图1 克菌丹含量检测色谱条件图

参考文献

[1] FAN K，WANG J，FU L，LI X J，ZHANG Y，ZHANG X D，ZHAIH，QU J L. Sensitivity of Botryosphaeria dothidea from apple to te⁃buconazole in China [J]. Crop Protection，2016，87: 1-5.

参考文献

[1] FAN K，WANG J，FU L，LI X J，ZHANG Y，ZHANG X D，ZHAIH，QU J L. Sensitivity of Botryosphaeria dothidea from apple to te?buconazole in China [J]. Crop Protection，2016，87: 1-5.