手机扫码访问本站
微信咨询
心血管疾病是一种严重威胁人类健康的疾病，该病具有“发病率高、致残率高、死亡率高”等特点，目前已成为导致人类死亡的头号病因。因此，寻找能够有效治疗心血管病的药物成为了临床面临的首要问题。传统的活血化瘀中药丹参，因其具有祛瘀止痛、活血通经的功效，目前已被广泛用于心血管疾病的治疗。研究发现，丹酚酸(salvianolicacids)是丹参(拉丁学名：salviamiltiorrhizabunge)中含量最丰富的水溶性物质，而丹酚酸B则是丹酚酸中含量最多、生物活性最强的化合物。研究表明，丹酚酸不仅对心肌缺血/再灌注损伤具有保护作用，同时对心肌梗死及心肌细胞肥均有保护作用。
1. 丹酚酸B在心血管疾病中作用
1）丹酚酸B对心肌梗死的保护作用：采用冠状动脉结扎方法构建大鼠心肌梗死(myocardialinfarction，MI)模型，考察丹酚酸B对MI的保护作用。结果显示，与对照组相比，丹酚酸B能够对MI发挥明显的心脏保护作用。机制研究表明，丹酚酸B主要通过抑制瘦素和内皮素－活性氧簇(ET-ＲOS)的上调以及恢复心肌中心肌细胞肌浆网钙ATP酶2a(sarco/endoplasmicreticulumATPase2a，SEＲCA2a)和受磷蛋白的正常表达，进而发挥保护心脏的作用。
2）丹酚酸B对MI/Ｒ损伤的保护作用：MI/Ｒ时会产生大量自由基，使得细胞膜脂质过氧化反应增强，膜流动性和通透性发生改变，进而导致电生理活动异常，诱发和促进心律失常的产生。由于心肌细胞脂质过氧化反应增强，致使心肌缺血区的过氧化产物如丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量增多；冠脉流出液中乳酸脱氢酶(lacticdehydrogenase，LDH)和肌酸磷酸激酶(creatinephosphokinase，CPK)升高以及心肌组织中超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)减少。研究发现，丹酚酸B能够明显提高MI/Ｒ损伤大鼠心肌组织中的SOD活力，可有效对抗氧自由基引起的毒害作用，从而减轻心肌细胞的损伤。通过构建大鼠MI/Ｒ模型考察丹酚酸B对MI/Ｒ损伤的保护作用，发现与对照组相比，给予丹酚酸B能够明显增加血浆中肌钙蛋白(troponins，CTn)、肌酸激酶同工酶(creatinekinase-MB，CK-MB)的含量，同时明显降低血浆中一氧化氮(nitricoxide，NO)和总超氧化物歧化酶(totalsuperoxidedismutase，TSOD)的水平，表明丹酚酸B对大鼠MI/Ｒ损伤有明显的保护作用。进一步研究发现，丹酚酸B能够缓解氧化应激、减少钙超载以及改善内皮功能。
3）丹酚酸B具有抑制心肌细胞肥大的作用：考察丹酚酸B对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)诱导的新生大鼠心肌细胞肥大的影响，结果表明，丹酚酸B能够抑制AngⅡ诱导的心肌细胞的肥大，同时发现心钠素和脑钠素mＲNA表达下降及细胞表面积减少。机制研究发现，丹酚酸B能够抑制聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1［poly(ADP-ribose)polymerase-1，PAＲP-1］的活性；同时发现过表达PAＲP-1能够减弱丹酚酸B抗心肌细胞肥大的效应，这些研究表明丹酚酸B具有很好的抑制心肌细胞肥大的作用。
4）丹酚酸B能够抑制动脉粥样硬化的形成：通过实验考察了丹酚酸B对动脉粥样硬化的作用，结果表明用丹酚酸B处理血管平滑肌细胞可有效抑制血小板衍生生长因子(platelet-derivedgrowthfactor，PDGF)诱导的细胞增殖和迁移，同时可明显增加血红素氧合酶1(hemeoxygenase-1，HO-1)的表达；与此同时，丹酚酸可明显减少活性氧簇(reactiveoxygenspecies，ＲOS)的产生及降低烟酰胺腺嘌呤二核
苷酸磷酸/还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP/NADPH)的比率。用人脐静脉内皮细胞研究发现，丹酚酸B能够明显诱导HO-1的产生，同时有效的抑制肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor，TNF-α)诱导的nuclearfactor-κB(NF-κB)的激活；而采用siＲNA抑制HO-1的表达可消除丹酚酸对血管内皮细胞的保护作用，同时阻断了HO-1缺失细胞的增殖、迁移和炎症。进一步的机制研究表明，丹酚酸B是通过活化核因子E2相关因子(nuclearfactor-E2-relatedfactor2，Nrf2)，进而诱导HO-1的表达，从而抑制血管细胞的增殖、迁移和炎症，进而发挥抗动脉粥样硬化的作用。
5）丹酚酸B能够有效降低门静脉高压：采用内皮素1(endothelin-1，ET-1)诱导小鼠门静脉高血压，考察丹酚酸B对门脉高压小鼠肝脏内血液微循环的影响，结果表明，与对照组相比，丹酚酸B能够明显降低门脉高压小鼠肝脏内的平均血流和微循环流速，进而发挥降低门脉高压的作用。研究表明，丹酚酸B能够降低大鼠的门静脉高压，并且研究发现丹酚酸B主要是借助大鼠肝脏内的巨噬细胞而发挥作用。
2. 丹酚酸B调控心血管效应的机制
1）Akt-eNOS信号介导丹酚酸B对MI/Ｒ损伤的保护作用：研究发现，Akt-eNOS是再灌注损伤补救酶(reperfusioninjurysalvagekinase，ＲISK)信号转导通路的组成之一，通过影响下游相关蛋白的表达，进而对心脏产生保护作用。在这一通路中，Akt处在中心环节，也是最主要的靶酶，只有磷酸化的Akt才能发挥一系列的生物活性。通过结扎冠状动脉制备大鼠MI/Ｒ损伤模型，考察丹酚酸B对MI/Ｒ损伤大鼠的保护作用，研究表明，丹酚酸B可增加Akt的磷酸化水平进而导致其活化，活化的Akt进一步激活其下游靶标eNOS使其磷酸化，进而通过下游一系列的生物效应发挥对MI/Ｒ损伤的保护作用。
2)TLＲ4-NFκB-TNF-α炎症通路介导丹酚酸B保护心肌细胞损伤：通过用脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)诱导新生大鼠心肌细胞炎症损伤，并探讨丹酚酸B对心肌细胞损伤的保护作用。结果发现，给予LPS后该组的乳酸脱氢酶和肿瘤坏死因子-α的浓度明显高于其他组，表明造模成功；而给予丹酚酸B处理后，LDH和TNF-α的浓度明显下降。与此同时，免疫组化结果显示，给予LPS后，Toll样受体4(toll-likereceptors，TLＲ4)和NF-κB的表达明显升高；而给予丹酚酸B后，TＲ4和NF-κB的表达明显下降。说明在用LPS诱导新生大鼠心肌细胞损伤的早期阶段，TLＲ4-NF-κB-TNF-α通路被迅速激活，而丹酚酸B发挥保护心肌细胞损伤的作用，很可能是通过抑制该通路来实现的。
3）自噬介导丹酚酸B保护心肌细胞损伤：通过实验考察自噬对饥饿心肌细胞的影响，同时观察丹酚酸B对饥饿心肌细胞中自噬的效应。结果发现，心肌细胞饥饿3h后会诱发自噬，进而导致细胞损伤，并且发现饥饿细胞中的LC3-Ⅱ的表达呈现时间依赖性的增加；而给予丹酚酸B后，能够明显抑制LC3-Ⅱ的增加，同时细胞活力及心肌细胞中ATP的水平也明显增加。该研究表明丹酚酸B能够通过阻断过度自噬，进而发挥保护作用。
4）线粒体凋亡途径介导丹酚酸B抑制心肌梗死后心肌细胞的凋亡：通过结扎冠脉左前降支构建大鼠心肌梗死模型，进而考察丹酚酸B对心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡的影响。结果表明，丹酚酸B可以明显降低心肌细胞的凋亡率。作者进一步考察丹酚酸B对凋亡相关基因表达的影响，结果发现丹酚酸B可以明显降低Bax的表达，同时发现丹酚酸B也明显降低了STAT-3及IL-6的表达。这表明线粒体凋亡途径参与调控了丹酚酸B抑制心肌梗死后心肌细胞的凋亡。
方法1：一种高纯度丹酚酸B的制备方法：
a.首先将中药材丹参粉碎，第一次在去离子水100度微沸的条件下加入粉碎的丹参提取1小时，用丹参重量5倍量的水；然后在小于50度PH1—6.5的条件下提取2---3次，每次时间40分钟，用丹参重量3倍量的水；
b.提取液过滤后通过大孔吸附树脂层析，用水洗脱后，用20---90％的C1---C5的低级醇解吸，将解吸液减压浓缩后，得到丹酚酸B的粗品；
c.丹酚酸B的粗品进一步经纤维素层析，以低级醇或丙酮洗脱，以水或C1---C5的低级醇解吸，合并含丹酚酸B的组分，减压浓缩，冷冻干燥，得到高纯度的丹酚酸B。
d.在a、b、c步骤中要用PH值调节物质将PH值调节至1—6.5。
方法2：一种采用盐析制备高纯度丹酚酸B的方法，包括以下步骤：
（1）将丹参粉碎后用醇溶剂、水或醇水混合液提取，过滤并减压浓缩后获得膏状丹参粗提物；
（2）将膏状丹参粗提物经过简单的纯化处理得到膏状丹酚酸B粗提物；所述纯化处理采用沉淀、萃取、大孔树脂层析、正向色谱或反向色谱；沉淀法包括酸沉、水沉和醇沉，水沉是将水不溶的低极性杂质沉淀析出，醇沉是将醇不溶的杂质沉淀析出，酸沉是将酸性条件下不溶的杂质沉淀析出。大孔树脂包括弱极性和非极性树脂如D101、AB-8、HPD-100等。反相色谱填料包括反相硅胶和反相树脂如C18硅胶、CG161、葡聚糖凝胶LH-20等。
（3）将膏状丹参粗提物或膏状丹酚酸B粗提物溶于有机溶剂，得到丹酚酸B粗溶液，在缓慢搅拌下滴加成盐剂，成盐pH为3-4，成盐温度为25-45℃，析出沉淀丹酚酸B盐；所述丹酚酸B粗溶液中的含固量为10~30%（重量百分比），所述丹酚酸B粗溶液中丹酚酸B的重量百分比含量为5~80%，成盐剂的摩尔量为丹酚酸B摩尔量的1-2.5倍，成盐剂为弱碱溶液及钾、钠、钙、镁、氨、胺的有机盐溶液或钾、钠、钙、镁、氨、胺的碳酸盐溶液；所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇、丙酮、乙腈、四氢呋喃、二氧六环、二甲亚砜、甲酰胺或乙酸乙酯中一种或两种，以乙酸乙酯和无水乙醇的混合溶液为佳；
（4）将丹酚酸B盐经酸析脱盐法、萃取脱盐法或大孔树脂层析脱盐法脱盐，干燥后获得高纯度的丹酚酸B。
[1] 丹酚酸B在心血管疾病中药理作用研究进展
[2] 丹酚酸B的药动学及相关研究进展
[3] CN200710144939.5高纯度丹酚酸B、制备方法及其应用
[4] CN201510167813.4一种采用盐析制备高纯度丹酚酸B的方法