当前位置: 首页 > CAS号数据库 > 43043-74-9 > 43043-74-9 / 去氧紫草素的含量

手机扫码访问本站

微信咨询

43043-74-9 / 去氧紫草素的含量

背景及概述[1]

紫草药材中的萘醌类是主要的有效成分,含量约占3%~6. 5%。文献报道在新疆紫草中得到的萘醌类化合物,包括去氧紫草素、紫草素、β-羟基戊酰紫草素、β-二甲基丙烯酰紫草素、β-羟基异戊酰阿卡宁、乙酰紫草,其中,乙酰紫草醌、紫草醌、去氧紫草素等萘醌类色素为紫草药材的主要有效成分。

含量测定[1]

1 仪器与试剂

1. 1 仪器

Waterse2695 高效液相色谱仪,Waters2998 二极管阵列检测器; KQ-250DB 型数控超声波清洗器(昆山市超声波仪器有限公司);电子天平FR224CN(上海奥豪斯仪器有限公司制造);电热恒温水浴锅HH. SY11-NY2C(北京市长风仪器仪表公司);SHBIII 循环水式真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司) 。

1. 2 材料与试剂

去氧紫草素对照品(上海源叶生物科技有限公司 B21034-10MG); 山东紫草、 安徽紫草和新疆紫草(药店购买,经段瑞老师鉴定);乙腈色谱纯(天津永大试剂有限公司);甲醇色谱纯(天津永大试剂有限公司) 。

2 试验方法与结果

2. 1 溶液配制

2. 1. 1 对照品溶液的制备

精密称取去氧紫草素的对照品1 mg,置 10 ml 的容量瓶中,用甲醇溶解,

稀释至刻度,摇匀,即得质量浓度为 0. 1 mg/ml 的对照品溶液,置阴凉干燥处,避光环境保存。

2. 1. 2 供试品溶液的制备

将干燥紫草药材粉碎,过 60 目筛, 精密称取紫草药材粉末1. 0 g,置于 50

ml 的锥形瓶中,加入甲醇 25 ml,超声提取30 min,振摇后静置冷却约10 min,滤过,滤渣加20 ml 的甲醇,超声提取20 min,合并甲醇滤液并定容至50 ml,置40 ℃恒温水浴蒸干,残渣用甲醇溶解并定容至25 ml,用0. 45μm的微孔滤膜过滤, 既得供试品溶液。

2. 2 方法学考察和样品测定

2. 2. 1 色谱条件和系统适应性试验

色谱柱: Symmetry C18 BDS 柱(250 mm×4. 6 mm,5μm); 流动相:乙腈∶水( 80∶20);流速: 1. 0 ml/min; 检测波长: 265 nm;柱温: 35 ℃;进样量: 20 μl; 检测时间: 30min。在此色谱条件下,去氧紫草素的理论塔板数大于5000,与相邻色谱峰分离度大于 1. 7,对称因子为1. 06。

2. 2. 2 专属性试验

取空白溶液、对照品溶液、三个产地的供试品溶液适量,按“2. 2. 1”项下色谱条件进样,记录色谱图(图1)。由图 1 可见,空白溶液色谱在对照品色谱相应的位置无吸收峰,表明在该试验条件下其他组分对测定结果无干扰,专属性较好。

去氧紫草素的含量

2. 2.3 线性关系的考察

精密量取去氧紫草素对照品溶液(0. 1 mg /ml) 各1. 0 ml、2. 0 ml、3. 0 ml、 4. 0ml、5. 0 ml,分别置于 10 ml 容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,配成10. 0μg /ml、20. 0μg /ml、30. 0 μg/ml、40. 0μg /ml、50. 0 μg /ml 的溶液,分别取各溶液20μl 进样,在上述色谱条件下进行分析。以对照品浓度(μg /ml) 为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y),绘制标准曲线并进行回归计算可得线性回归方程为: Y = 34769X-62579,r = 0. 9994, 表明去氧紫草素在 10. 00~50. 00μɡ/ml范围内线性关系良好。

2. 2. 4 精密度试验

取线性关系项下取配好的去氧紫草素对照品溶液,连续进样 6 次,记录在 265 nm处去氧紫草素的色谱图,以峰面积计算,RSD 值为0. 31% ,表明仪器的精密度良好。

2. 2. 5 稳定性试验

称取三个产地的紫草粉末,按“2. 1. 2” 项下的方法制备供试品溶液, 按“2. 2. 1”项下的色谱条件进样,分别在 0 h,2 h,4 h,6 h,8 h,10h 不同时间段内重复进样三次,每次进样 20μl,记录去氧紫草素的峰面积,计算其含量,RSD 分别为安徽 0. 10% ,新疆 0. 07%,山东 0. 06% ,表明三个产地去氧紫草素在 10 h 内较稳定。

2. 2. 6 重复性试验

分别取山东、新疆、安徽产地的紫草粉末,按“2. 1. 2” 项下的方法分别制备供试品溶液并处理成6份,依次进样每次20μl,平行测定 6次,计算去氧紫草素的百分含量分别为山东71. 40% ,新疆 67. 83%,安徽134. 37%,RSD 值分别为0. 04%,0. 10%,0. 58% 。表明方法重复性较好。

2. 2. 7 回收率试验

准确量取已知含量的安徽供试品溶液共 9 份,每份 1 ml,分别精密加入去氧紫草素对照品适量( 约相当于安徽紫草中去氧紫草素含量的 80%,100%,120% ),置于 5 ml 的容量瓶。实验分为三组,每组分为 3 份。按“2. 2. 1” 项下色谱条件进样 20μl,测定峰面积,计算去氧紫草素的含量。测得低、中、高三个不同浓度的平均加样回收率分别为 100. 17%, 112. 82%, 125. 28%, 9 个加样回收率数据的RSD 值 0. 10%,在误差允许的范围内。

2. 2. 8 样品的含量测定

分别称取山东、新疆和安徽紫草粉末,按“2. 1. 2”项下方法制备供试品溶液,各处理成3 份,按“2. 2. 1”项下色谱条件进样测定,山东、新疆、安徽紫草中去氧紫草素的百分含量分别为 71. 42% 、67. 77% 、135. 32%,RSD 分别为0. 02%、0. 04%、0. 04% 。其结果见表 1,实验结果表明,不同产地的紫草中去氧紫草素的含量存在差别。

去氧紫草素的含量

主要参考资料

[1]朱永乐,董娜,曲晓兰,齐永秀.HPLC法测定不同产地紫草中去氧紫草素的含量[J].泰山医学院学报,2017,38(11):1229-1231.