酶联免疫吸附测定（ELISA）是一种标记免疫测定技术。这种技术是使用最广泛的技术，也是一种快速简单技术，它是利于抗原与抗体特异性结合进行定性和定量分析。ELISA实验是最灵敏的免疫分析方法之一，广泛应用各种研究和行业，包括环境、食品安全、制药和疾病标志物诊断。
目录
一、ELISA基本原理
在ELISA实验中，目标分子（抗原或抗体）被固定在酶标板（96孔）上，然后加入含有酶标记抗体或抗原溶液，如果样本中含有目标分子，它们将与固定在酶标板上抗体或抗原特异性结合。最后，加入酶底物，在酶的催化下，底物发生化学反应，产色有色产物，颜色的深浅与目标分子的量呈正相关。最后，通过检测仪器对颜色进行定量分析，既可得目标分子的含量。
二、ELISA操作流程
ELISA操作流程基本包括包被、加样、洗涤、酶标记、洗涤、底物显色和检测等，下面为大家详细介绍：
包被。包被是ELISA第一步，将抗原或抗体以适当浓度（通常在1-10µg/mL）稀释后，加到固相载体（如96微孔板）中。在4℃过夜或在室温下孵育1-2个小时，使其结合。孵育后，用洗涤缓冲液（如PBS或TBST）洗涤3次，去除未结合的成分。
加样。将待检测样本（可根据需要稀释）加入固相载体中。在适宜的条件下（如37℃孵育一小时）使样本中的目标分子与固相载体上抗原或抗体结合。
洗涤。使用洗涤缓冲液洗涤3-5次，以去除未结合的成份，减少背景干扰。
酶标记。加入酶标记的抗原或抗体，通常稀释度为1：1000至1:5000。在37℃孵育一小时，使其与结合目标分子形成稳定复合物。
洗涤。再次使用洗涤缓冲液洗涤3-5次，去除未结合的成分。
底物显色。加入适量的酶底物（如TMB或OPD），并在适宜的条件下（如室温孵育15-30分钟）进行反应。监测反应的显色，直到达到所需颜色深度。
检测。使用酶标仪在适度波长（如450nm）下测定显色产物的吸光度，进行定量分析得出目标分子含量。
ELISA应用领域
ELISA应用领域较为广泛，在生物学研究中，ELISA可以用来检测细胞因子、生长因子、激素等活性物质，了解其在细胞生长、分化、凋亡等过程作用。
在医学诊断领域，ELISA技术广泛应用各种传染病、肿瘤、自身免疫性疾病诊断和检测。例如乙肝病毒、艾滋病病毒、肿瘤标志物等均可通过ELISA进行检测。
在食品安全领域，ELISA技术可以检测食品中农药残留、兽药残留、毒素等的检测，保障食品安全等。
环境检测领域，ELISA技术可以检测水体、土壤等环境样品中的有害物质，如重金属、有机污染物等，为环境保护提供支持！
ELISA注意事项
在进行ELISA实验，了解ELISA注意事项可以在实验中少走弯路。下面是纪宁生物为大家总结一些实验注意事项：
1、如果是ELISA，可以在一周内采集并检测样品，并保存在2-8°C。如果未及时完成检测，请将样品分割并冷冻在-20°C或-80°C，以避免重复冻融。
2、ELISA试剂盒的检测范围与样品中分析物的浓度范围不一样。建议在实验前根据相关文献估算模型中分析物的浓度，并通过初步实验确定选择。
3、应仔细收集ELISA血清样品，以避免溶血，因为红细胞裂解会释放具有过氧化物酶活性的物质，并且溶血的发作可能会增加非特异性显色。
4、如果存在细菌污染，标本必须新鲜检测。细菌可能含有内源性HRP，可能会导致假阳性反应。如果在冰箱中保存时间过长，可能会发生聚合反应，间接法ELISA会在背景下加深。
5、ELISA样品处理实验中，如果样品反复冻融，蛋白效价会降低，因此建议多次冷冻少量待测样品。
上述是纪宁为大家介绍ELISA原理，通过对原理认识有助于了解认识ELISA实验流程。如果您对原理还有疑问，欢迎私信。上海纪宁是一家专注于生物、生化领域产品销售，主要经营的有ELISA试剂盒、生化试剂、抗体、标准品、对照品、细胞、血清、培养基等生化科研试剂产品。
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