在进行ELISA实验中，包被是实验的第一步，良好的包被可以确保后续的免疫识别和信号输出步骤顺利进行。接下来，上海纪宁生物将为大家介绍ELISA试剂盒的包被原理，了解包被原理有助于ELISA实验顺利展开。
目录
什么是ELISA包被
ELISA包被是将特定的抗原或抗体结合到固相载体表面上的过程，这一过程也被称为固相化。包被的目的是将待检测物质（抗原或抗体）固定在固相载体表面上，使其能够捕捉和结合溶液中的目标分子，为后续反应提供基础。
ELISA包被原理
包被原理是主要是利于抗原抗体之间的特异性结合，以及蛋白质与固体载体（微孔板）之间的物理吸附（如疏水作用，范德华力等）。其原理如下：
1、静电作用。蛋白质表面带有不同电荷（如正电荷和负电荷），在适当PH环境下可以与微孔板表面电荷发生静电吸附。这种吸附在一定的条件下具有较强的稳定性，便于后续的实验操作。
2、疏水作用。蛋白质与固相载体（如塑料微孔板）表面通常具有一定的疏水性，因此在合适的条件下会自发的吸附在载体表面上。疏水作用是一种较弱的相互作用，但在常规的ELISA包被中已足够将抗原或抗体固定在微孔板表面。
3、氢键和范德华力。在包被过程中，蛋白质分子与载体之间还会通过氢键和范德华力进一步增强吸附稳定性，这有助于抗原或抗体有效结合。
ELISA包被步骤
1.将抗原或抗体按照说明书进行稀释，加入一定量的包被液，混合均匀。
2.将稀释后的抗原或抗体加入酶标板中，每孔加入100μL，轻轻摇晃酶标板，使抗原或抗体均匀分布。
3.将酶标板放入湿盒中，4℃孵育一定时间（一般为1-2小时），使抗原或抗体与酶标板充分结合。
4.孵育结束后，用洗涤液清洗酶标板，每次清洗3-5分钟，共清洗3-5次，以去除未结合的抗原或抗体。
5.在洗涤完成后，加入一定量的底物溶液，轻轻摇晃酶标板，使底物溶液充分覆盖酶标板上的抗原或抗体。
6.将酶标板放入湿盒中，37℃孵育一定时间（一般为15-30分钟），使底物溶液与抗原或抗体充分反应。
7.孵育结束后，用终止液终止反应，每孔加入100μL，轻轻摇晃酶标板，使终止液充分覆盖酶标板上的底物溶液。
8.用酶标仪检测各孔的光密度值（OD值），记录数据并进行后续分析。
ELISA包被注意事项
1、确定合适的包被抗原/抗体浓度
包被抗原浓度是比较重要的，过低或过高都会影响后续检测，确定合适的包被抗原/抗体浓度至关重要。在进行包被实验之前可以详细参考说明书选择合适浓度的包被溶液。一般包被浓度为1-10µg/mL，根据实验的灵敏度需求进行优化。
2、包被后洗涤步骤要彻底
包被洗涤不充分，残留的未结合的抗原/抗体会导致后续步骤中出现背景信号高、影响结果的准确性。建议使用洗涤液反复冲洗3-5次，每次尽量排干液体，确保充分洗涤。
上述为大家介绍了ELISA试剂盒实验中包被原理，通过了解上述ELISA包被原理，你也可以不被ELISA包被所困扰。也欢迎您了解纪宁ELISA试剂盒，我们为科研提供高特异性、高灵敏ELISA试剂盒，助力您科研。
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