细胞冷冻保存是生物研究工作流程中一个重要组成部分。在低温下，活细胞中的生物和化学反应会大大减少，这一现象被广泛用于长期储存细胞和组织。接下来上海纪宁生物为您介绍：
1、什么是细胞冻存
2、细胞冻存步骤
3、细胞冻存注意事项
什么是细胞冻存？
细胞冻存是利用低温保存细胞和组织以备将来使用的过程。该技术涉及将细胞冷却到极低温度（-80˚C至-196˚C）并暂停其细胞代谢，从而无限期地保存细胞。当细胞内的水结冰时，冰的形成会导致溶质失衡并破坏细胞结构。通过使用适当的技术和含有适当冷冻保护剂和添加剂的冷冻介质，研究人员可以最大限度地提高细胞解冻后的细胞活力，以供细胞培养。
细胞冻存步骤
1.制备细胞冻存液:应根据细胞类型和实验需求选择合适的配方，常用的冻存液配方包括：10%DMSO+90%胎牛血清(FBS)或10%DMSO+90%细胞培养基。冻存液配制好后，应进行过滤除菌或在无菌条件下操作，并分装保存，避免反复冻融。
2.收集和处理细胞:取形态良好，处于对数生长期的细胞，用适宜的消化酶进行消化，待细胞形态发生改变并开始脱落时终止消化。将细胞悬液收集至离心管中，以[根据细胞类型调整]g离心[根据细胞类型调整]分钟。弃去上清液，用少量预冷的冻存液轻轻重悬细胞，并进行细胞计数。
3.调整细胞浓度:根据细胞数量和目标细胞浓度，分次加入适量预冷冻存液，轻轻混匀，最终将细胞浓度调整至1-5×10^6cells/mL。
4.分装细胞:将调整好浓度的细胞悬液分装到已标记好的冻存管中，每管0.5-1mL。
5.冻存:将冻存管放入程序降温盒或用泡沫等包裹，确保降温速度为-1℃/分钟左右，然后放入-80℃冰箱过夜，最后转移至液氮罐中长期保存。
细胞冻存注意事项
1、适当防护设备。在进行细胞冻存必须穿戴适当个人防护设备，避免手套污染，用过的手套与其它污染实验废物一起处置。
2、实验前和实验后需灭菌处理。实验前，实验台打开紫外灯照射20-30分钟；实验后需要用75%酒精擦拭超净台、边台、倒置镜的载物台。
3、凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子，均需使用75%酒精彻底擦拭瓶子的外表面。对于已开封或需要进行除菌操作的物品，请确保酒精完全挥发后，再谨慎靠近酒精灯火焰进行操作。
4、冻存前，为了避免细胞造成损伤，切勿消化时间过长、吹打力度过重、离心转速过大或过长等。
5、冻存细胞长期保存在液氮，不建议在-80度长期保存。
6、细胞在离心后，尽量的吸干上清液，尽量减少细胞培养基等残留物，以免稀释冻存液。
7、DMSO溶于培养基会释放大量的热容易烫伤细胞，因此，细胞冻存液需提前配制，冷却后再使用。
上述是纪宁为大家介绍的细胞冻存的流程，上述内容仅供参考！如有不妥的地方欢迎指正。
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