细胞培养：细胞计数

  细胞计数是细胞培养比较关键步骤，通过细胞计数，用于确定细胞数量，判断细胞数量是否满足实验需求。细胞计数有人工手动计数、自动细胞计数仪法等，目前实验室较为常用的细胞计数法是在显微镜下使用血细胞计数板人工计数。

  细胞计数操作步骤

  一、准备好血细胞计数板

  首先，用无水乙醇清洁血细胞计数板表面和盖玻片；

  其次，再用纯水清洁血细胞计数板表面和盖玻片；

  接着，清洗后用洗耳球吹干；

  最后，在血细胞计数板计数池上方盖上专用的玻璃片。

  注意事项：在上述清洗过程，最好不要触碰血细胞计数板计数池，避免标示线损坏。

  二、制备细胞悬浮液

  贴壁生长的细胞，使用胰酶消化使细胞从培养瓶表面脱落；

  旋涡混均或使用移液器反复吹细胞悬浮液，尽量减少细胞团簇；

  悬浮细胞则可以直接进行取样计数；

  细胞悬液的计数浓度通常建议在 5×10⁵个细胞/mL到5×10⁶个细胞/mL 之间。

  注意事项：尽量减少细胞团簇；

  如需计算活率，则许按1:1的比例混合细胞悬液和0.4%台盼蓝染液，轻轻混匀，静置1-2分钟，使染料充分进入细胞。

  三、细胞加样

  移液器轻吹细胞悬浮液使其混合均匀；

  将细胞悬浮液与台盼蓝染料按1:1体积混合均匀；

  取出10uL细胞悬液，将细胞悬液滴加于血细胞计数板边缘凹槽处，此时液滴将在虹吸的作用下进入盖玻片下方的计数池。

  注意事项：

  每次加样前要混均细胞悬浮液，防止细胞沉降造成取样误差增大；

  在加样过程，要一次性将细胞悬液注入计数室，防止气泡产生，否则要重做；

  加样时不要将细胞悬浮液直接吹入计数池，会造成细胞分布不均匀。

  四、人工细胞计数

  主要的计数工具：10X物镜的显微镜、血细胞计数板。

  加样后，将血细胞计数板静置2-3分钟；

  把血细胞计数板放置在显微镜的载物台进行观察，记录和计数；

  分别计数大方格1，2,3,4中细胞总数。

  注意事项：

  计数时，建议重复1-2次，取平均值，减小计数误差；

  4个区域细胞的数量偏差不少于5%，否则重新加样。

  对横跨刻度上的细胞，依照“数上不数下，数左不数右”的原则进行计数。

  为降低细胞计数误差，浓度最好控制在5×105个细胞/ml以上（每个大方格有50个以上细胞）；

  计数时，只计数完整细胞，如有聚团细胞细胞则按一个细胞进行计数。

  上述是为大家介绍采用细胞计数板计数方法和步骤。希望你可以通过上述步骤对您细胞计数有了解，除此之外，细胞计数还有自动计数法，本篇不在累赘。下伙伴们可以业余时间去尝试和对比，找到它们之间特点而提高细胞计数效率。