细胞培养：认识细胞传代

 　　细胞传代培养是细胞培养的常规方法之一，当细胞随着培养时间的延长和细胞分裂时，细胞之间会发生接触和接触，生长速度减慢甚至停止，并且也会因营养不足和代谢产物的积累而不利于细胞生长或中毒。因此，一旦细胞在培养瓶中长满，就需要稀释并接种到多个培养瓶中，细胞才能继续生长。

　　细胞传代目的 不仅可以扩大细胞培养数量，还可以避免细胞因生长停滞甚至衰减而大量死亡的困境，因此，为了使细胞保持在对数生长期，维持细胞旺盛的分裂能力，此时需要进行细胞传代。

　　为什么要对细胞进行分裂

　　一旦开始细胞培养，就无法无限期地生长，因为有限空间内的细胞数量不断增加，营养物质消耗，以及毒性代谢物的增加最终导致细胞死亡。传代培养或分裂细胞会产生比原始培养物细胞密度更低的新培养物。通过去除培养基并将细胞转移到新鲜的生长培养基和基质中，细胞可以获得新鲜的营养物质，并去除有毒代谢物，从而可以长期维持培养。最初接种细胞后，生长从滞后期开始，然后进入对数期，细胞呈指数增殖，然后进入生长率和死亡率相等的稳定期。（图1）。在死亡阶段，细胞因缺乏营养或培养条件不充分而死亡，例如当细胞因高或过度汇合而开始争夺空间时。

　　图1：细胞的生长曲线：培养细胞的生长曲线由四个阶段组成：生长开始前的潜伏期（滞后期）、指数生长期（对数期）、细胞数量快速增长逐渐减缓的稳定期和细胞因缺乏营养和生活条件不当而死亡的死亡期。对数期应更换培养基，细胞应在达到稳定期之前进行传代。

　　为了使细胞保持最佳培养条件并积极生长，必须定期更新生长培养基并进行传代培养。根据细胞类型，对数期可以多次更换培养基。传代培养细胞的最佳时间是在对数期和稳定期之间，即细胞汇合之前。

　　为什么要检查细胞？

　　每天检查细胞培养物（包括在传代培养前检查）非常重要，这是监测细胞健康状况、检查污染和确定何时分裂细胞的一种手段。首先可以用肉眼在宏观层面检查培养物是否有真菌污染、浑浊度和培养基中的颗粒以及培养基颜色变化指示的意外pH值变化。但应在高放大倍数下确认没有细菌污染。此后，应使用倒置显微镜仔细检查细胞的一般形态和生长模式。倒置显微镜的光学元件位于标本下方。因为细胞附着在培养皿底部，所以从这个角度可以轻松观察到它们。观察时应使用总放大倍数100–200倍和相差，因为大多数细胞在正常明场照明下难以观察到。

　　如何对培养细胞进行传代？

　　准备细胞进行传代培养的最常用方法是使用胰蛋白酶等蛋白水解酶破坏细胞间和细胞与底物之间的键。胰蛋白酶与乙二胺四乙酸(EDTA)结合可使细胞脱离生长表面。胰蛋白酶切断将细胞固定在培养皿上的粘着斑，EDTA充当钙螯合剂。

　　根据细胞类型或下游实验，可以使用其他蛋白酶替代胰蛋白酶，例如天然胶原酶或合成解离混合溶液。

　　通过去除钙，参与细胞间相互作用的钙粘蛋白被破坏，细胞彼此分离。一旦它们不再与生长表面和周围细胞结合，就可以轻松地将它们分离并在新的细胞培养皿中生长。每种细胞类型的细胞培养条件和传代培养方法各不相同。在整个传代培养过程中，在无污染的环境中工作非常重要。在开始时、胰蛋白酶消化过程中、细胞计数和分裂后对细胞进行检查是必不可少的。为了获得一致的结果和跟踪实验，保存良好的记录和文档也很重要。

　　好了，今天纪宁生物为大家介绍细胞传代，因篇幅有限，细胞传代步骤单独一篇文章为大家详细介绍。细胞传代对细胞培养是非常关键的步骤，它决定了下游实验细胞培养的好坏。了解细胞传代原理，为后续细胞培养步骤打下基础。