纪宁生物(HSY细胞株)人支气管上皮细胞接受后处理

纪宁生物(HSY细胞株)人支气管上皮细胞接受后处理

接受后处理

处理1

收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们

处理2

请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h

处理3

弃去T25瓶中的培养基，添加 6ml本公司附带的完全培养基

处理4

如果细胞密度达80%-90%请及时进行细胞传代，传代培养用6ml本公司的完全培养基

处理5

接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系

细胞操作

复苏细胞

将含有1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜)第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代

如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养:

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加 1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

4.4 min 1000rpm离心去掉上清。加1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml 细胞悬液，注意冻存管做好标识。

细胞冻存

待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类:

1.弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2.4 min 1000rpm离心去掉上清。加1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml 细胞悬液，注意冻存管做好标识。

3.将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

注意事项

1.收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2.仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3.用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。

4.静置细胞贴壁后，请将细胞瓶内的培养基倒出，留 6~8mL 维持细胞正常培养，待细胞汇合度80%左右时正常传代。

5.请客户用相同条件的培养基用于细胞培养，培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。

售后服务

细胞予重发

1.细胞运输中遭遇的各种问题，细胞丢失瓶身破损、培养液严重漏液等，重发。

2.收到细胞未开封，如出现污染状况，重发。

3.收到细胞3天内，发现污染问题，经核实后，重发。

4.常温发货的细胞静置2小时后，干冰冻存发货的细胞复苏2天后，绝大多数细胞未存活，经核实后，重发。

5.常温发货的细胞静置22小时并且未开封或干冰冻存发货的细胞复苏2天后，出现污染，经核实后，重发。

6.细胞活性问题，请在收到产品3天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后，重发。

细胞不重发

1.客户操作造成细胞污染，不重发。