1.取出培养瓶，打开瓶盖，用吸管吸出旧的培养液。
2.用无 Ca2+ 、Mg 2+ 的平衡盐溶液轻轻漂洗培养物1 次到 2 次，洗去残余血清后弃去平衡盐溶液。
3.在培养皿内加入胰蛋白酶溶液， 室温下消化 5min 到 15min 显微镜下观察细胞突起缩回近似圆形、细胞之间的间隙增大时停止消化。
4.吸管吸去消化液后立即加入含血清培养液或蛋白酶抑制剂，抑制胰蛋白酶的活性，使消化终止。
5.用弯头吸管吸取培养皿内的培养液反复吹打瓶皿底壁，使已经消化的细胞脱离瓶皿底壁。
6.低速离心，弃去上清液。
7.用新鲜培养液将细胞沉淀重新悬浮，计数并调整细胞密度。
8.根据传代目的将细胞悬浮液接种到一个或多个新的培养器皿中。
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