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elisa试剂盒操作方法

  试剂盒在国内有许多种叫法,例如:ELISA检测试剂盒、ELISA Kit、酶联免疫试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒、酶联免疫分析试剂盒、酶免试剂盒等。
  
  比较常见的叫法是ELISA检测试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒等;ELISA试剂盒适用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗体ELISA检测,自从60-70年代问世以来,得到全世界科研工作者的认可及推崇,在欧美及中国获得很大的推广,尤其是国内生化领域的长足发展。ELISA生物试验是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在免疫学检验的各领域中。
  
  为了保证ELISA试剂盒实验质量,我们需要掌握一些小技巧以助于实验的成功,那么ELISA试剂盒的操作技巧您知道吗?
  
  如若掌握了这些实验技巧之后,在做ELISA实验中,试验起来会更熟练,大大的降低了实验过程中的风险,ELISA试剂盒实验的入门新手掌握了这些知识后,操作起来都会快的多。
  
  双抗体夹心法
  
  1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。
  
  2.加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
  
  3.加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。
  
  4.加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。
  
  5.终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
  
  6.结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
  
  间接法
  
  1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜;
  
  2.次日洗涤3次;
  
  3.加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤;
  
  4.(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml;
  
  5.37℃孵育35-60分钟,洗涤;
  
  6.最后一遍用DDW洗涤。
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